[发明专利]一种米尔贝霉素前体供应模块及其重组菌的构建与应用

说明书

一种米尔贝霉素前体供应模块及其重组菌的构建与应用，属于基因工程技术领域。为了提高米尔贝霉素的产量，本发明提供了一种前体供应模块，根据该模块，经过基因工程改造构建重组载体，并进一步制备重组菌BC04/Pyr，BC04/FBCAA，BC04/Phe和BC04/RgltA，利用上述获得的重组菌发酵生产米尔贝霉素，通过HPLC检测可知，上述重组菌可以不同程度提高米尔贝霉素A3/A4产量，而对照菌株BC04/C1和BC04/C2米尔贝霉素A3/A4的产量与出发菌株BC04无显著差异。该结果表明本发明所提出的米尔贝霉素前体供应模块能够有效提高米尔贝霉素A3/A4的产量，对于提高次级代谢产物在链霉菌中的产量具有十分重要的意义。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及一种米尔贝霉素前体供应模块及其重组菌的构建与应用。

背景技术

米尔贝霉素是一系列具有强杀虫和驱虫活性的十六元大环内酯类抗生素，在农业和兽医领域作为杀虫剂或驱虫剂得到了广泛应用，因此，提高工业菌米尔贝霉素的产量以降低其生产成本具有重要意义。

然而米尔贝霉素等聚酮化合物是以酰基-辅酶A为前体，通过脱羧缩合而合成的。因此，其产量往往受到现有前体供应的限制。通过识别米尔贝霉素合成过程中的限速步骤，挖掘与细胞内前体供应相关的目标基因或初级代谢步骤，然后最大限度地提高前体通量，使其流向抗生素的合成，对于进一步提高工业菌株抗生素的单位产量，从而降低米尔贝霉素的生产成本具有重要意义。

发明内容

本发明为了提高米尔贝霉素的产量，提供了一种米尔贝霉素前体供应模块，所述米尔贝霉素前体供应模块含有启动子和前体供应通路相关基因，其中启动子的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示，前体供应通路相关基因为1)、2)、3)和4)中的任意一种：

1)基因sbi_07787，sbi_05430，sbi_05431，sbi_05432，sbi_05443，sbi_05444和sbi_05445；

2)基因sbi_06919，sbi_06920，sbi_06921，sbi_06922，sbi_08383，sbi_02642，sbi_02643，sbi_06924，sbi_03090，sbi_04601，sbi_08381，sbi_08661，sbi_07561和sbi_07154；

3)基因sbi_01968，sbi_01969，sbi_02832，sbi_08941，sbi_00715，sbi_05418，sbi_05419，sbi_05420，sbi_05421和sbi_05422；

4)基因sbi_07003。

本发明还提供了一种含有上述的米尔贝霉素前体供应模块的重组载体，当前体供应通路相关基因为1)或2)或3)时，所述重组载体的出发载体为pSET152；当前体供应通路相关基因为4)时，所述重组载体的出发载体为pSETddCpf1。

本发明还提供了一种含有上述米尔贝霉素前体供应模块的重组菌，所述重组菌的出发菌株为冰城链霉菌(Streptomyces bingchenggensis)BC04。

本发明还提供了上述的米尔贝霉素前体供应模块在提高米尔贝霉素产量中的应用。

本发明还提供了上述的重组载体在提高米尔贝霉素产量中的应用。

本发明还提供了上述的重组菌在提高米尔贝霉素产量中的应用。

本发明的有益效果：