[发明专利]一种高效鉴定稻花香香米基因的引物组合物及其方法在审
| 申请号： | 202111437264.X | 申请日： | 2021-11-30 |
| 公开（公告）号： | CN114107544A | 公开（公告）日： | 2022-03-01 |
| 发明（设计）人： | 张林;庄文姝;刘巧泉;蔡文璐;卞中;邹怡婷;谢东;曹东平 | 申请（专利权）人： | 扬州大学 |
| 主分类号： | C12Q1/6895 | 分类号： | C12Q1/6895;C12Q1/6858;C12N15/11 |
| 代理公司： | 扬州苏中专利事务所(普通合伙) 32222 | 代理人： | 沈志海 |
| 地址： | 225009 *** | 国省代码： | 江苏;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 高效 鉴定 花香 基因 引物 组合 及其 方法 | ||
1. 一种高效鉴定稻花香香米基因的引物组合物，其特征是，所述引物组合物由四条引物构成，四条引物序列如下：
BADH2-8bp-1：AAACTGGTAAAAAGATTATGGC
BADH2-8bp-2：AACCATAGGAGCAGCTGAAATA
BADH2-8bp-3：ACTGGCTACTAGAATGATGCT
BADH2-8bp-4：ACCCTGGTGTAGACAAGGTA 。
2.一种利用权利要求1所述引物组合物鉴定稻花香香米基因的方法，其特征是，包括以下步骤：
将水稻叶片用球磨仪震荡破碎，加入500ul TPS缓冲液，65 ℃放置45分钟；12000转速离心10分钟，吸300ul上清液到新的离心管中，加入等体积异丙醇，室温放置45分钟；12000转速离心10分钟，获得DNA沉淀，倒掉上清液，加入500ul 75%乙醇；7500转速离心5分钟，倒掉上清液并吸干残液，室温放置30分钟后加入100ul双蒸水获得DNA溶液；
将获得的DNA进行PCR扩增，反应体系为20ul，包含DNA模板2ul、2× Taq MasterMix10ul、每条引物各0.5ul，最终用水补齐至20ul；PCR反应条件为：94℃变性3分钟，随后进行 “94℃变性20秒-55℃退火30秒-72℃延伸20秒”，最后72℃延伸5分钟完成反应；
PCR完成后，吸取10ul扩增产物进行3%浓度的琼脂糖凝胶电泳，EB染色后用紫外凝胶成像系统拍照；根据电泳图谱偏下位置是否出现一条154 bp的条带来判断待测水稻品种中是否含有稻花香香米基因。
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