[发明专利]一种石油烃降解菌丰度的测定方法在审
| 申请号： | 202111439978.4 | 申请日： | 2021-11-30 |
| 公开（公告）号： | CN114196728A | 公开（公告）日： | 2022-03-18 |
| 发明（设计）人： | 吴蔓莉;刘恒;刘泽梁;高欢 | 申请（专利权）人： | 西安建筑科技大学 |
| 主分类号： | C12Q1/06 | 分类号： | C12Q1/06;C12Q1/24 |
| 代理公司： | 北京润泽恒知识产权代理有限公司 11319 | 代理人： | 苟冬梅 |
| 地址： | 710055*** | 国省代码： | 陕西;61 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 石油 降解 菌丰度 测定 方法 | ||
1.一种石油烃降解菌丰度的测定方法，其特征在于，所述方法包括：
S1、使用缓冲溶液对油污土壤进行预处理，获得含有石油烃降解菌的待测菌悬液；
S2、用DNA染色工作液对所述待测菌悬液中的活菌和死菌进行恒温避光染色，获得染色后的待测菌悬液；
S3、借助流式细胞仪对染色后的待测菌悬液中的石油烃降解菌进行计数，获得石油烃降解菌的丰度值。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤1中，所述预处理包括：
S11、将0.1g～1g油污土壤与1mL～10mL缓冲溶液的混合物进行3h振荡、离心、第一次过滤，获得土壤菌悬液；
S12、向土壤菌悬液中加入0.01g～0.1g石油，振荡培养7d，离心，获得待测菌，并用15mL缓冲溶液对待测菌进行1～3次离心清洗，最后向待测菌中加入20mL缓冲溶液，进行第二次过滤，获得含有石油烃降解菌的待测菌悬液。
3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述第一次过滤为定性滤纸过滤。
4.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述第二次过滤为5μm滤膜过滤。
5.根据权利要求1或2所述的方法，其特征在于，所述缓冲溶液为：PBS缓冲溶液或pH＝7.4的Tris-HCl缓冲溶液。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤2中，所述DNA染色工作液由0.22μm尼龙膜过滤后的二甲基亚砜、SYBR Green I染料和PI染料组成；
其中，所述二甲基亚砜、所述SYBR GreenI染料和所述PI染料的体积比为79：1：20。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤2中，所述DNA染色工作液与所述染色后的待测菌悬液的体积比为1：40。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤2中，所述恒温避光染色的工作温度为35℃，工作时间为15min。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤2中，所述恒温避光染色在恒温金属浴中进行。
10.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在所述步骤3中，所述流式细胞仪的工作流速为1000–1500events/μL。
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