[发明专利]非洲猪瘟病毒多基因串联DNA疫苗及应用

说明书

本发明涉及非洲猪瘟病毒多基因串联DNA疫苗及应用，属于生物疫苗领域。本发明将非洲猪瘟病毒已经验证的免疫保护相关抗原基因p30、p54以及未被验证的A224L进行合理串联后，插入到pVAX‑1载体上，构建得到一种非洲猪瘟病毒p30、p54和A224L串联DNA疫苗。实验证明，该重组DNA疫苗具有良好的免疫原性，在免疫的猪中诱导产生高水平的体液免疫应答以及细胞免疫应答，且抗体对ASFV具有很好的中和效果。且同时证明了拟核蛋白A224L具有诱导保护性免疫应答的能力，能够提高该重组DNA疫苗的免疫效果。

技术领域

本发明属于生物疫苗技术领域，具体涉及非洲猪瘟病毒多基因串联DNA疫苗及应用。

背景技术

非洲猪瘟（Africa swine fever，ASF）是由非洲猪瘟病毒（African swine fevervirus, ASFV）引起猪发病的一种高度传染性的动物疫病，死亡率几乎为100%。1921年，非洲猪瘟在肯尼亚被首次发现，随后传入欧洲，2007年传入格鲁吉亚，并通过格鲁吉亚传至包括俄罗斯在内的许多东欧国家。2018年，非洲猪瘟传入我国，由于没有疫苗可用，给养猪业和我国经济造成巨大的经济损失，造成了恶劣的政治影响，国家急需安全、有效的疫苗防控疫情。

ASFV为一种有囊膜的双链DNA病毒，是非洲猪瘟病毒科非洲猪瘟病毒属的唯一成员，也是唯一已知的DNA虫媒病毒。其结构复杂，由囊膜、衣壳、内膜、核心壳和基因组五个部分组成，呈二十面体结构。ASFV基因组全长为170-190 kb，包含150多个开放阅读框，编码50多种结构蛋白和100多种非结构蛋白。正是由于ASFV基因组庞大及结构复杂，加之感染与免疫机理不清，灭活疫苗不能提供免疫保护，减毒活疫苗存在严重安全隐患，基因工程疫苗保护效果差等诸多原因，导致至今无安全、有效的ASF疫苗。

我国作为全球养猪第一大国，不仅生产超过全球50%的猪肉，而且也是我国最主要的动物源性肉品，养猪业的健康可持续发展，不仅影响居民生活消费，食品安全，而且直接影响国家经济的发展。针对目前我国ASF现状，国家急需安全、有效的疫苗用于防控和净化ASF，保障我国养猪业安全、健康可持续发展，保障国家生物安全和食品安全。

为了解决ASF灭活疫苗无效，减毒活疫苗存在严重免疫副反应，基因工程亚单位疫苗免疫效果差等制约ASF疫苗研发的技术瓶颈，本研究利用DNA疫苗优势，即以细胞免疫为主，兼具体液免疫全面免疫效果的特性，采用基因操作技术构建了携带ASFV主要结构蛋白基因的重组DNA，以期研发出安全、有效的ASF DNA疫苗，为防控ASF提供理论依据和技术支撑，保障养猪业健康可续发展。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的一在于提供一种非洲猪瘟病毒多基因串联DNA疫苗，目的二在于提供一种编码非洲猪瘟病毒多蛋白的串联DNA，目的三在于提供一种用于构建非洲猪瘟病毒DNA疫苗的重组抗原，目的四在于提供一种包含编码上述重组抗原的核苷酸序列的重组表达载体，目的五在于提供串联DNA、重组抗原或重组表达载体在制备针对非洲猪瘟病毒的DNA疫苗方面的应用，目的六在于提供上述DNA疫苗在制备非洲猪瘟病毒疫苗或药物中的应用。本发明将非洲猪瘟病毒已经验证的免疫保护相关抗原基因p30、p54以及未被验证的A224L进行合理串联，所得重组DNA疫苗具有良好的免疫原性，且抗体对ASFV具有很好的中和效果。

为了实现上述目的，本发明采用的具体方案为：

一种非洲猪瘟病毒多基因串联DNA疫苗，所述DNA疫苗包含编码以下（a）或（b）所示的重组抗原的DNA序列：

（a）所示的p30、p54串联的DNA序列，核苷酸序列如SEQ ID NO：02；

（b）所示的p30、p54、A224L串联的DNA序列，核苷酸序列如SEQ ID NO：01。