[发明专利]一种基于FRET的均相免疫检测方法及检测组合物

说明书

本发明涉及一种基于FRET的均相免疫检测方法及检测组合物，属于分析化学技术领域。解决了现有基于FRET的均相免疫检测方法存在的灵敏度低、背景荧光高等技术问题。本发明的检测组合物，包括标记有抗原的铋基材料和标记有抗体的稀土掺杂发光纳米晶；或者，包括标记有抗体的铋基材料和标记有抗原的稀土掺杂发光纳米晶；其中，抗原和抗体为能发生特异性结合反应的抗原抗体对；铋基材料为铋基二维纳米片状材料或金属离子掺杂的铋基二维纳米片状材料。本发明还提供使用该检测组合物进行抗体或抗原检测的方法。该基于FRET的均相免疫检测方法具有背景荧光干扰小，检测灵敏度高，成本低，方法简单，便于操作等优点。

技术领域

本发明属于分析化学技术领域，具体涉及一种基于FRET的均相免疫检测方法及检测组合物，该检测组合物能够用于抗原的检测和抗体的检测。

背景技术

基于荧光共振能量转移(FRET)的均相免疫检测方法，是近年来研究和应用的热点。FRET是指发生在一定距离内(一般10nm)的供体与受体之间的无辐射能量转移过程。这种空间限域效应为FRET均相检测技术赋予多种优点，如对待测物不需分离提纯、操作方法简便、检测速度快、选择性良好、适用范围广、可同时进行多组分检测等。由此可见，供体与受体的选择对于实现上述快速、高测灵敏度的检测方法至关重要。对于供体而言，目前稀土掺杂发光纳米晶(RENCs)基供体材料成为分析检测领域的研究前沿。RENCs是一类近红外光激发(如，980，800或1530nm)，发射从紫外、可见至近红外波段的光子转换发光材料，具有多谱带发射、发射谱线窄、光化学性质稳定、荧光寿命较长、(反)斯托克斯位移大，无光漂白现象、光谱可调的特点。较传统的有机染料，量子点等供体材料，其可有效避免生物自荧光，降低散射干扰，使得RENCs成为复杂生物基质(血液、尿液、唾液、生物体等)中构建传感模型的理想供体材料。

尽管RENC-FRET基生物检测技术近年来引起了人们的极大关注，但到目前为止，由于检测灵敏度低其距离实际应用还有差距。由能量传递公式可知，提高能量传递效率，一方面是缩短供-受体间作用距离，另一方面是提高供体的发光效率。但由于RENCs是由独立发光中心的稀土离子组成，并且能量转移效率和距离的六次方成反比，仅仅位于表界面且距离受体足够近的发光中心才能与受体产生FRET作用，而内部的发光离子对此过程并无贡献，如现有的共掺体系中(Yb³⁺，Er³⁺)只有表面的Er³⁺参与能量传递，因此严重降低了FRET效率。另一方面，尽管通过增加RENCs壳层厚度抑制表面猝灭效应，可增加RENCs的发光亮度，但同时也增加了供-受体间的作用距离，这使得检测灵敏度提高有限。因此，为了克服上述问题，开拓新的设计思路和新方法是，发展适用范围更广泛的检测应用，构建检测灵敏度高、荧光背景低的高效RENC-FRET检测方法尤为关键。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种基于FRET的均相免疫检测方法及检测组合物，以解决现有基于FRET的均相免疫检测方法存在的灵敏度低、背景荧光高等技术问题。

为实现本发明的目的，本发明采用如下技术方案：

本发明提供一种检测组合物，

包括标记有抗原的铋基材料和标记有抗体的稀土掺杂发光纳米晶；

或者，

包括标记有抗体的铋基材料和标记有抗原的稀土掺杂发光纳米晶；

所述抗原和抗体为能发生特异性结合反应的抗原抗体对；

所述铋基材料为铋基二维纳米片状材料或金属离子掺杂的铋基二维纳米片状材料。

优选的是，

所述标记有抗原的铋基材料与所述标记有抗体的稀土掺杂发光纳米晶的摩尔比为1:(1～10)；

所述标记有抗体的铋基材料与所述标记有抗原的稀土掺杂发光纳米晶的摩尔比为1:(1～10)。