[发明专利]一种携带TMTP1和HSV-TK的溶瘤腺病毒重组体、其构建方法及应用

说明书

本发明公开了一种携带TMTP1和HSV‑TK的溶瘤腺病毒重组体、其构建方法及应用，属于医学基因工程技术领域。本发明是在人类5型腺病毒基因的E1A保守序列2区缺失第920‑946nt区域的27个碱基，再在Hexon高变区5的第19641‑19655nt区域插入编码肿瘤靶向肽TMTP1的基因序列，同时缺失E3区位于ADP基因第29477‑29714nt区域，构成缺失区，再在所述缺失区插入编码HSV‑TK基因的全长编码序列并引入Cla1酶切位点。本发明还公开了上述溶瘤腺病毒重组体的构建方法及应用。本发明的携带TMTP1和HSV‑TK的溶瘤腺病毒重组体兼具理想的靶向作用和强效杀伤作用。

技术领域

本发明涉及一种携带TMTP1和HSV-TK的溶瘤腺病毒重组体、其构建方法及应用，属于医学基因工程技术领域。

背景技术

基因治疗(gene therapy)是指将外源基因导入靶细胞，以纠正或补偿因基因缺陷或基因表达异常引起的疾病。作为基因治疗载体，溶瘤病毒治疗恶性肿瘤的发展前景良好。在众多溶瘤病毒疗法的载体中，重组腺病毒载体是应用最为广泛的，其临床可行性和安全性已获公认。腺病毒基因治疗载体具有以下生物学优势和临床应用优势：(1)感染谱广，对多种组织源性的细胞，无论是处于分裂期还是静止期的细胞，均能有效攻击，抗癌谱广；(2)腺病毒进入细胞后，不整合到宿主染色体，无突变和致癌的危险性，临床应用安全，使用后仅产生类似感冒样症状，无造血功能和免疫功能抑制；(3)临床应用方便，有腔隙(如腹腔、胸腔和颅腔)给药、局部或瘤体内直接注射(一点或多点)以及介入治疗等途径；(4)腺病毒在体内持续表达仅两到三周，尤其适合肿瘤治疗；(5)经静脉或局部应用仅产生轻微的炎症反应，副作用轻微；(6)临床级数量的腺病毒易于生产和纯化。基于以上的优势，越来越多的腺病毒载体被构建产生，并显示出良好的临床应用前景。

虽然腺病毒相较于其它各种基因治疗载体表现出明显的优势，国内外现有的腺病毒治疗载体也逐步取得了一些突破性的进展，但仍然有一些不可规避的缺点限制其广泛应用，具体如下：(1)肝脏趋向性。腺病毒进入生物体后，无论是静脉系统性注射，或是瘤内注射，胸腔、腹腔等局部注射，生物体内凝血因子十(Fx)会迅速识别腺病毒衣壳蛋白Hexon，与其结合，并将腺病毒带至肝脏，凝血因子的另一侧则与肝细胞表面的硫酸类肝素蛋白多糖(Heparan Sulfate Proteoglycans,简称HSPGS)结合，即凝血因子在腺病毒与肝细胞间形成桥梁，被肝脏捕获的腺病毒则逐渐被kupffer细胞或者肝脏中的巨噬细胞吞噬。而未被清除的腺病毒在肝脏中大量复制，导致肝脏急性损伤，表现为转氨酶迅速升高。(2)腺病毒感染肿瘤细胞，依赖于肿瘤细胞表面柯萨奇腺病毒受体(CAR)。而在大多数肿瘤细胞中，受体处于低表达状态，不利于腺病毒进入肿瘤细胞内发挥杀伤作用。

综上，目前肿瘤治疗技术和实践中均存在各种弊端，因此，有必要提供一种新的靶向与强效杀伤兼具的治疗应用途径，以解决现有技术的不足。

发明内容

本发明的目的之一，是提供一种携带TMTP1和HSV-TK的溶瘤腺病毒重组体。

本发明解决上述问题的技术方案如下：一种携带TMTP1和HSV-TK的溶瘤腺病毒重组体，该携带TMTP1和HSV-TK的溶瘤腺病毒重组体为Ad5/ΔE1A/TMTP1ΔADP/HSV-TK，其核苷酸序列如SEQ ID NO.23所示，是在人类5型腺病毒基因的E1A保守序列2区缺失第920nt-946nt区域如SEQ ID NO.1所示的27个碱基，再在Hexon高变区5的第19641nt-19655nt区域插入如SEQ ID NO.15所示的编码肿瘤靶向肽TMTP1的基因序列，同时缺失E3区位于ADP基因第29477nt-29714nt区域，构成缺失区，再在所述缺失区插入如SEQ ID NO.22所示的编码HSV-TK基因的全长编码序列并引入Cla1酶切位点。

本申请的发明人，为了获得上述携带TMTP1和HSV-TK的溶瘤腺病毒重组体，进行了如下工作：

人类5型腺病毒，英文名称为Human adenovirus type 5，简称Ad5。