[发明专利]一种牛疱疹病毒1型UL41缺失毒株及其获取方法有效
| 申请号： | 202111446165.8 | 申请日： | 2021-11-29 |
| 公开（公告）号： | CN114107230B | 公开（公告）日： | 2023-08-11 |
| 发明（设计）人： | 高明春;戴海越;郭永丽;王君伟;陈佳奇;孟野;佟欣;吴佳楠;杨鸿术;安冉 | 申请（专利权）人： | 东北农业大学 |
| 主分类号： | C12N7/01 | 分类号： | C12N7/01;C12N15/38;C12N15/85;A61K39/265;A61P31/22 |
| 代理公司： | 哈尔滨市阳光惠远知识产权代理有限公司 23211 | 代理人： | 王志新 |
| 地址： | 150030 黑龙*** | 国省代码： | 黑龙江;23 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 种牛 疱疹病毒 ul41 缺失 及其 获取 方法 | ||
1.UL41基因缺失在增强牛疱疹病毒1型（
（1）将SEQ ID NO .1所示的引物和SEQ ID NO .2所示的引物进行寡聚化反应，得到sgRNA寡聚化片段；
（2）将步骤（1）获得sgRNA寡聚化片段与pX330-Cas9载体连接获得重组的载体pX330-sgRNAUL41；
（3）将步骤（2）获得的重组载体转染牛肺成纤维细胞，然后再进行牛疱疹病毒1型病毒感染牛肺原代成纤维细胞，感染48 h后经过冻融得到混合病毒悬液，进行蚀斑纯化，获得牛疱疹病毒1型UL41缺失毒株。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤（1）所述寡聚化反应的条件为：30 ℃水浴10 min，95 ℃作用5 min，降至室温。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤（1）所述寡聚化反应的体系为：SEQ IDNO .1所示的引物、SEQ ID NO .2所示的引物、ATP、T4 PNK、10×T4 PNK Buffer和ddH2O。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，步骤（3）所述重组载体以4 μg/孔剂量转染牛肺成纤维细胞；所述牛疱疹病毒1型毒株以0.01 MOI感染牛肺原代成纤维细胞。
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