[发明专利]一种地龙中纤溶活性多肽及其制备方法

权利要求书

1.一种地龙中纤溶活性多肽的制备方法，以抗凝血活性作为所述纤溶活性多肽的评价指标，其特征在于，包括如下步骤：

步骤一，取地龙鲜品冻干粉，加入NH₄HCO₃溶液超声辅助提取30-60min，离心，于沉淀中加NH₄HCO₃溶液超声辅助提取30-60min，合并上清液，3K滤膜超滤，收集分子量大于3K的组分得到地龙蛋白；

步骤二，取步骤一所得的地龙蛋白用NaCl溶液溶解，加入碱性蛋白酶，在pH 9-10、温度55-60℃条件下，超声辅助酶解8-10小时，酶解产物通过10K滤膜超滤，收集小于10K的组分得到酶解多肽；

步骤三，将步骤二得到的酶解多肽溶解于10mM Tris-HCl中，然后加载到HiPrep16/10DEAE FF预装柱，流动相A为20mM的Tris-HCl溶液，其pH＝8.0，流动相B为20mM的Tris-HCl溶液，并含有1M NaCl，pH＝8.0，梯度洗脱，收集每个馏分，冷冻干燥后测定抗凝活性；

步骤四，取抗凝活性最高的步骤三所得馏分加载到凝胶Sephadex G-10色谱柱，超纯水洗脱，取第一组馏分即得所述纤溶活性多肽。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤二中，在pH＝9、温度55℃条件下酶解。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤二中，超声辅助酶解8小时。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤二中，所述碱性蛋白酶与地龙蛋白的质量比为1：50。

5.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤三中，所述梯度洗脱具体为：

6.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤三中，洗脱流速3ml/min，波长214nm。

7.一种根据权利要求1-7任一项所述的制备方法制备得到的地龙中纤溶活性多肽。

8.根据权利要求7所述的地龙中纤溶活性多肽，其特征在于，所述纤溶活性多肽的序列为HEPLPEP或EYPLPEP。