[发明专利]一株芽孢杆菌及其应用

说明书

本发明提供一株芽孢杆菌，该芽孢杆菌于2021年04月27日以芽孢杆菌Bacillus sp.MZ‑4E4保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M2021465；本发明进一步将前述所述的芽孢杆菌应用于高浓度烟草废弃物水提液；在一些实施方式中，将前述所述的芽孢杆菌接入高浓度烟草废弃物水提液中进行发酵，并将发酵物制作成烟草薄片。

技术领域

本发明属于生物工程领域，特别涉及到一株具有改善再造烟叶品质的芽孢杆菌及其分离 方法及应用。

背景技术

烟草是我国十分重要的经济作物之一。我国年产烟叶约500万吨，烟秆约216万吨。收 获的烟叶最主要的用途便是用来制作成卷烟或其它的烟草制品，在烟叶或卷烟的加工过程中 会产生约占原料三分之一的边角料，如烟梗、碎烟叶、烟末、低档次烟叶等，称为烟草废弃 物。并且，目前主要使用造纸法再造烟叶技术对这些烟草废弃物进行回收利用，将其制备成 再造烟叶(Reconstituted Tobacco)，又称烟草薄片或再造烟草。再造烟叶的性状接近或优于天 然烟叶的产品，一般为片状或丝状，在卷烟中充当填充料。通过添加适量的烟草薄片，可以 降低卷烟的生产成本、节省烟草原料、提高烟草利用率、并改善卷烟的物理性能，从而达到 降焦、减害的目的。

在造纸法再造烟叶的工艺流程中，经过固液分离、液处理和薄膜浓缩获得了高浓度烟草 废弃物水提液(Tobacco waste extract，TWE)，是一种十分重要的中间产物。TWE是一种高 浓度的植物水提取液，含有大量的烟草内源水溶性化合物，密度为1.3g/cm3，pH值为4，还 原糖含量为163.8g/L，尼古丁含量为19.5g/L(根据具体的工艺及烟草原料，其具体数值会 有些变化)。因此，可将TWE视为一种具有环境胁迫的逆境。

TWE中含有大量的微生物，但绝大部分都无法适应该环境。目前，国内外在微生物调控 TWE领域中的研究较少，主要分为三个方面，一是从烟草组织或根际土壤中分离得到微生物 用于调控TWE，二是从TWE中分离获得微生物用于调控TWE，三是使用外源性微生物用于 调控TWE。并且，这些研究的调控对象大多是低浓度的TWE稀释液(5-20％)，菌株的抗逆 性不足，尚未见在高浓度TWE中具有调控能力的微生物报道，本领域需寻求一种在TWE具有高抗逆性、且能够改善再造烟叶品质的菌株。

发明内容

鉴于以上研究背景，本发明的主要目的在于提供一株在TWE中具有能够改善再造烟叶 品质的菌株。

具体地，本发明实施方式提供一株芽孢杆菌，该芽孢杆菌于2021年04月27日以芽孢杆 菌Bacillus sp.MZ-4E4保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:M2021465。

在一些实施方式中，该菌株的菌株MZ-4E4的16S rDNA序列如SEQID NO:1所示。

本发明进一步将前述所述的芽孢杆菌应用于高浓度烟草废弃物水提液；在一些实施方式 中，将前述所述的芽孢杆菌接入高浓度烟草废弃物水提液中进行发酵，并将发酵物制作成烟 草薄片。

本发明提供一株芽孢杆菌Bacillus sp.MZ-4E4，该菌株能够在TWE 80％稀释液中(还原 糖含量为131.0g/L，尼古丁含量为15.6g/L)进行正常的代谢活动，将其培养过的TWE80％ 稀释液制作成烟草薄片，其品质有显著的提高，尤其是在香气上有比较明显改善。

附图说明

图1为抗逆菌株MZ-4E4的形态学观察结果(a为菌株在LB平板上的菌落形态，b为相差显微镜下的观察结果，c为透射电镜下的观察结果，d为菌株与藤黄八叠球菌共同进行革 兰氏染色的结果，e为藤黄八叠球菌的革兰氏染色结果)；

图2为菌株MZ-4E4的系统发育树。

具体实施方式

实施例1筛选

从TWE中分离纯化抗逆性菌株的方法，包括下述步骤：