[发明专利]一种乳仓鼠肾细胞BHK-21-E-200及作为病毒疫苗生产细胞株的应用

说明书

本发明属于病毒疫苗生产技术领域，具体涉及一种乳仓鼠肾细胞BHK‑21‑E‑200及作为病毒疫苗生产细胞株的应用。本发明提供了一种能够稳定传代且高产口蹄疫病毒疫苗的细胞株BHK‑21‑E‑200，相较原始BHK‑21细胞，所述的细胞株BHK‑21‑E‑200的146s含量提升90％，且无外源性污染；而且所述的细胞株BHK‑21‑E‑200的单位细胞产毒量较原始BHK‑21细胞升高90％以上，且生长速率较原始BHK‑21细胞提升，能够用于口蹄疫病毒疫苗的高效生产。

技术领域

本发明属于病毒疫苗生产技术领域，具体涉及一种乳仓鼠肾细胞BHK-21-E-200及作为病毒疫苗生产细胞株的应用。

背景技术

口蹄疫是一种具有高度传染性的偶蹄类动物疫病，由口蹄疫病毒(含多种血清型：O、A、C、SAT1、SAT2、SAT3和Asia1)引起。猪、牛、羊等养殖畜类及水牛等野生动物对口蹄疫病毒易感，感染发病率100％，其爆发会对畜牧业造成严重的损失。目前最为有效的防控手段是口蹄疫疫苗的接种。然而随着畜牧业的发展、种群密度的加大等，都增加了防疫的难度，也进一步提高了对疫苗的需求。

近年来，各类新型疫苗不断涌现，大量文献介绍了这些新型疫苗所能解决的口蹄疫疫病防控问题以及现有疫苗存在的问题。但是，目前被广泛使用的疫苗仍以灭活病毒疫苗为主，考虑到灭活疫苗价格昂贵、疫苗146S含量不高、生产成本高昂等问题，因此提高现有工艺的疫苗生产能力，加大产能，降低生产成本，无疑是解决当前疫苗需求困境的最佳策略。

目前利用BHK-21悬浮细胞生产口蹄疫病毒疫苗使用的接毒细胞密度通常在3×10⁶～5×10⁶cells/mL，根据病毒血清型不同，收获病毒完整颗粒在1-10μg/mL不等。“细胞密度效应”是指基于动物细胞培养技术的病毒生产工艺中发生的病毒收获量不能随接毒时细胞密度增高而增高，甚至出现下降的现象，是生产工艺在扩大规模和提高产能时的主要瓶颈。这一现象最有可能的原因是高密度细胞培养导致体系内重要营养物质缺乏(如葡萄糖、氨基酸)、有毒代谢副产物积累(如乳酸、氨)以及培养环境参数改变(如温度、转速等)，进而影响了细胞的生理状态以及后续的细胞产毒过程，因此对悬浮细胞改造提升细胞自身的产毒能力和生长适应能力是生产口蹄疫病毒疫苗的一项关键技术。

辐射生物物理学是研究辐射对生物器官和组织的效应中所涉及的基本物理、物理化学过程的规律及原理，Stoker M在《nature》杂志中报道X射线能够提高腺病毒在BHK细胞的转染率，我国从1986年开始用离子束法改良微生物、细胞性状，通过辐照诱变获得微生物、农作物、细胞的新基因、新性状，最终得到高产、稳定、低耗、抗菌等理想的新品种。尤其是重离子束在生物学领域应用，使得辐照育种在植物、微生物、细胞生物学上有了快速的发展。由于重离子束辐照优越性明显，目前已经在食品、药品、农业、能源等多个方面有了重要进展。中、高能离子束有其特殊的物理性质，如高激发性、传能线密度(LET)高和相对生物学效应(Relative biological effectiveness，RBE)大、尖锐的能量损失峰(Bragg峰)及氧增强比(Oxygen enhancement ratio，OER)较小等，并可精确控制入射深度和部位，同时注入离子的质量也可以选择，特别是兰州重离子加速器冷却储存环(HIRFL-CSR)建成出束后，使得可供选择的离子质量范围更广。¹²C⁶⁺重离子辐照育种的优越性为可获得的微生物、植物、细胞种类繁多、代谢多样、可塑性强。

本发明通过兰州重离子加速器冷却储存环(HIRFL-CSR)采用不同剂量的¹²C⁶⁺重离子辐照生产口蹄疫疫苗用的BHK-21细胞，筛选获得了一株高产口蹄疫疫苗病毒的细胞株，从而达到提高口蹄疫疫苗质量，降低口蹄疫疫苗生产成本的问题。

发明内容

针对上述问题，本发明的目的在于提供一种高产口蹄疫疫苗病毒的细胞株，从而达到提高口蹄疫疫苗质量，降低口蹄疫疫苗生产成本的问题。具体包括以下内容：