[发明专利]一种快速诊断1型糖尿病的多重免疫芯片及其制备方法和应用

说明书

本发明提供了一种快速诊断1型糖尿病的多重免疫芯片及其制备方法和应用，属于糖尿病检测技术领域。本发明提供的快速诊断1型糖尿病的多重免疫芯片是将表面增强拉曼光谱技术与蛋白芯片相结合，利用待检血清中抗体与芯片上抗原特异性结合，引起拉曼探针的特征峰发生蓝移，从而实现快速筛查1型糖尿病的目的。同时多重免疫芯片可同时检测多种胰岛自身抗体，具体检测迅速、检测结果准确性高的特点，这对1型糖尿病的早期诊断和初筛方面有着良好的应用前景，同时降低了芯片制作成本。

技术领域

本发明属于糖尿病检测技术领域，具体涉及一种快速诊断1型糖尿病的多重免疫芯片及其制备方法和应用。

背景技术

糖尿病是威胁人类健康的重大疾病，糖尿病人群中约10％为1型糖尿病。1型糖尿病，以往称为胰岛素依赖型糖尿病，常发生于儿童和青少年，但也可发生于任何年龄，甚至80～90岁时也可患病。病因是由于胰岛B细胞受到细胞介导的自身免疫性破坏，自身不能合成和分泌胰岛素。鉴于1型糖尿病大量胰岛细胞衰竭，极易发生多种并发症，病情不易控制的特点，已成为世界重大公共卫生问题之一。不同类型的糖尿病治疗方法不同，因此精准的分型诊断是给予糖尿病患者合适治疗的前提。

目前，普遍认为1型糖尿病主要受外界环境因素的影响导致患者体内存在胰岛自身抗体等免疫标志物，比如临床上常检测的谷氨酸脱羧酶抗体(GADA)、胰岛细胞抗体(ICA)、蛋白酪氨酸磷酸酶抗体(IA-2A)、胰岛素自身抗体(IAA)、羧基肽酶抗体(CPH-A)和锌转运体8自身抗体(ZnT8A)。自20世纪80年代末人们最初采用Western印迹法检测胰岛自身抗体以来，检测方法先后经历了免疫荧光法、免疫酶活性沉淀法、放射免疫法(RIA)、酶联免疫吸附分析法(ELISA)、放射结合分析法(RBA)等阶段。新近建立的方法有时间分辨荧光免疫法、荧光素酶免疫沉淀法(LIPS)、等离子体纳米胶体金技术和电化学发光(ECL)分析法等。较早建立的Western印迹法和免疫酶活性沉淀法操作繁琐费时，不适合临床实际应用。免疫荧光法的非特异性荧光难以控制和消除，且胰岛切片带来异源性干扰，无法标准化。ELISA商品化试剂盒价格昂贵；离子体纳米胶体金技术重现性差，有待进一步优化；LIPS法能解决抗原蛋白翻译后的修饰问题，但变异系数较大的问题尚待解决。

表面增强拉曼光谱(Surface-enhanced Raman spectroscopy，SERS)是由拉曼光谱衍生出来的一种高灵敏度、高分辨率的检测手段，特指在物质表面拉曼散射强度得到大幅度提高的拉曼光谱技术。建立重复性好、灵敏度高、特异性强的快速、高通量、多组分、低成本蛋白检测方法，必将是1型糖尿病未来发展趋势。SERS是未来分子光谱研究的重要方向之一，检测灵敏度高，可达到单分子水平。然而目前SERS检测技术仅依赖于检测单一免疫标志物，容易出现假阳性和假阴性，为了保证获得准确检测结果，常常要检测多个生物标志物，这会大大提高检测成本。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供一种快速诊断1型糖尿病的多重免疫芯片及其制备方法和应用，具有较高的检测准确性和较低的检测成本，对改善临床预后有积极价值。

本发明提供了一种快速诊断1型糖尿病的多重免疫芯片，包括载体和免疫芯片；所述载体带有若干个容纳腔；不同容纳腔固定有不同种类免疫芯片；

所述免疫芯片的基底表面连接1种1型糖尿病标志物的捕获抗原。

优选的，所述1型糖尿病标志物的捕获抗原捕获以下两种或多种抗体：GADA、ICA、IAA、ZnT8A、IA-2A和CPH-A。

优选的，所述1型糖尿病标志物的捕获抗原的浓度为8～12μg/ml。

优选的，所述免疫芯片的基底为羟基化硅片。

优选的，所述羟基化硅片表面形成一层纳米贵金属基底，在所述纳米贵金属基底上连接探针MBA。

优选的，所述1型糖尿病标志物的捕获抗原通过探针MBA与免疫芯片的基底表面结合。