[发明专利]一种基于单质粒的T7噬菌体病毒样颗粒自组装方法

说明书

本发明属于病毒样颗粒(Virus‑likeparticles,VLPs)自组装技术领域，公开了一种基于单质粒的T7噬菌体病毒样颗粒自组装方法，该自组装方法包括：构建表达质粒pRSFDuet‑1‑gp9‑gp10A，将其转入大肠杆菌BL21(DE3)，经诱导、表达、体内自组装、初步纯化得到T7噬菌体病毒样颗粒；其中，所述表达质粒pRSFDuet‑1‑gp9‑gp10A中含有T7噬菌体衣壳蛋白编码基因gp10A以及T7噬菌体支架蛋白编码基因gp9。本发明提供了一种制备T7噬菌体病毒样颗粒的新策略，为后续构建基于T7噬菌体病毒样颗粒的载体疫苗或靶向药物奠定基础。

技术领域

本发明属于病毒样颗粒(Virus-like particles,VLPs)自组装技术领域，尤其涉及一种基于单质粒的T7噬菌体病毒样颗粒自组装方法。

背景技术

T7噬菌体是一种宿主为大肠杆菌的烈性噬菌体，其原衣壳(Procapsid)，为T＝7L构象的正二十面体晶格结构，由主要衣壳蛋白(Gp10)、支架蛋白(Gp9)，连接蛋白(Gp18)和核心堆积蛋白(Gp14/Gp15/Gp16)组成。其中，衣壳蛋白Gp10有两种形式：Gp10A和Gp10B。Gp10B由Gp10A第341位氨基酸翻译移码产生，约占总衣壳蛋白的10％。

病毒样颗粒(Virus-like particles，VLPs)是一种由一个或多个病毒蛋白组装形成的、具有类似病毒形态的蛋白颗粒物质，其内部缺乏遗传物质，不能复制，因此不具有感染性。目前文献已报道的VLP，直径多介于25～100nm之间。作为一种生物纳米颗粒，病毒样颗粒具有以下优势：

(1)成分确定；

(2)直径较小，可被淋巴结中的抗原递呈细胞有效摄取，激活免疫应答；

(3)内部中空，可装载抗原或药物，实现靶向递送；

目前尚无利用单质粒共表达gp10A和gp9基因制备T7噬菌体病毒样颗粒的方法。仅有将T7噬菌体gp10全基因和gp9基因分别克隆到两个单独的质粒，并进行表达和体外自主装的文献报道，具体如下：

技术1：Mario E等将T7噬菌体gp9基因克隆到质粒pAR441的MSC上，将gp10基因克隆到质粒pAR3625的MSC上，随后共转导大肠杆菌BL21(DE3)pLysS菌株，通过诱导、裂解、体外自组装和纯化获得了T7噬菌体病毒样颗粒。

然而，表达gp10基因，会形成含两种衣壳蛋白(Gp10A和Gp10B)的病毒样颗粒，这种病毒样颗粒的结构成分不够确定，不利于在表面嵌入抗原制备载体疫苗；此外，多个表达质粒在遗传稳定性上也不如单一表达质粒。因此，亟需构建一种更加简单、稳定的T7噬菌体病毒样颗粒自组装方法，以弥补现有技术短板。

通过上述分析，现有技术存在的问题及缺陷为：

(1)通过表达T7噬菌体gp10基因和gp9基因所获得的病毒样颗粒，其成分不够单一和确定，会增加后续衣壳蛋白融合抗原(载体疫苗抗原)的构建难度。

(2)多质粒的遗传稳定性较差。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明提供了一种利用单质粒共表达T7噬菌体gp10A和gp9基因，并在大肠杆菌BL21(DE3)菌株内自组装形成T7噬菌体病毒样颗粒的方法。

本发明是这样实现的，一种基于单质粒的T7噬菌体病毒样颗粒自组装方法包括：

转入大肠杆菌BL21(DE3)，经诱导、表达、体内自组装、初步纯化得到T7噬菌体病毒样颗粒；

其中，所述表达质粒pRSFDuet-1-gp9-gp10A中含有T7噬菌体衣壳蛋白编码基因gp10A以及T7噬菌体支架蛋白编码基因gp9。

进一步，所述一种基于单质粒的T7噬菌体病毒样颗粒自组装方法包括以下步骤：