[发明专利]中国桔梗RPL13内参基因序列及其引物与应用

说明书

本发明涉及一个中国桔梗RPL13内参基因序列及其引物与应用，属于基因工程技术领域。所述RPL13内参基因的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。该RPL13基因可以做为对中国桔梗以及与其亲缘关系较近的桔梗科其它植物中的类黄酮/花青素合成途径中的色素合成相关基因在中国桔梗及其同科其它植物的蓝、紫、白3种不同花色花器官中进行基因表达谱分析研究的内参基因。也可以做为对中国桔梗及其同科其它植物中的茎、叶及蓝、紫、白3种不同花色花器官共5种不同组织部位中的目标基因进行表达谱分析研究时所用的内参基因。

技术领域

本发明属于基因工程技术领域，具体涉及中国桔梗类黄酮/花青素合成途径中的色素合成相关基因以及中国桔梗不同组织部位间目标基因进行表达分析的RPL13内参基因序列及其引物与应用。

背景技术

中国桔梗(Platycodon grandiflorus)为桔梗科(Campanulaceae)桔梗属(Platycodo n L.)多年生草本植物，别名包袱花、铃铛花、僧帽花等，原产我国，广布华南至东北。桔梗属仅中国桔梗一种。作为卫生部公布的第一批药食同源目录品种，中国桔梗具有很高的药用和食用价值。除了药食以外，中国桔梗因其花开似铃铛，有蓝、紫、白等花色，单瓣、重瓣等花型，植株挺拔优美，花朵色彩清新淡雅，作为一种很好的园林观赏植物。对中国桔梗的研究主要集中在栽培应用、药用成分检测及功能分析等方面，近年来随着生物技术的迅猛发展，开展了诸如目标基因筛选克隆、转录组分析、基因组测序等分子生物学领域的研究工作，但与其做为一种药、食、观赏兼用的多用途经济作物的重要性来比，分子方面的研究相对还较少，关于中国桔梗目标基因表达分析内参基因的相关研究更是鲜见报道。

基因表达分析是阐明植物生命周期中的遗传、信号传导及代谢途径等复杂调控过程的重要工具。目前，转录组测序技术已成为分析生物体基因转录表达水平的普遍方法之一。实时定量PCR(quantitative real-time PCR，qRT-PCR)由于具有定量准确，特异性强，敏感度高，重复性好等特点，被广泛应用于基因表达定量和转录组数据验证等研究工作。然而，由于在试验中受RNA质量、反转录效率、引物特异性、样品量以及扩增效率等因素的影响，容易造成qRT-PCR结果与目标基因的真实表达量之间存在一定误差。为了提高qRT-PCR结果的准确性，需利用内参基因进行标准校正，内参基因的稳定性对qRT-PCR结果的准确性具有决定性影响。一般以在生物体的各个组织及各个生长阶段表达水平都较为稳定的看家基因(house-keeping Gene)如：肌动蛋白基因(actin，ACT)、亲环蛋白基因(cyclophilin，CYP)、转录延伸因子基因(elongation factor，EF)、甘油醛-3-磷酸脱氢酶基因(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH)、组蛋白基因(histone，HIS)、18S核糖体RNA基因(18S ribosomal RNA，18SrRNA)、微管蛋白基因(tubulin，TUB)、多聚泛素酶基因(polyubiquitin，UBQ)等作为内参基因。理想的内参基因应该是在所有的细胞、生理特性和样品类型中都稳定表达，但是目前尚未发现这样理想化的内参基因。大量的实验研究表明，在不同的植物、组织及生理状态条件下，内参基因的表达量并不是始终稳定表达。而且选择不适当的内参基因往往会导致错误结论。因此，根据具体的物种、材料及试验条件筛选合适的内参基因至关重要。

对于植物类黄酮/花青素合成途径中的色素合成相关基因的表达谱分析，由于不同研究者分析所用的物种、样品组织及实验条件等的差异较大，所选用的内参基因也有较大差异，另外关于适用于中国桔梗的内参基因鲜见报道。所以有必要筛选出适合用来对中国桔梗类黄酮/花青素色素合成途径中的色素合成相关基因或其它目标基因进行基因表达谱分析的内参基因。

发明内容