[发明专利]89

说明书

本发明公开了一种supgt;89/supgt;Zr标记人骨髓间充质干细胞的方法。所述方法包括：将待标记的hMSCs与前体supgt;89/supgt;Zr‑oxine混合、孵育，得到supgt;89/supgt;Zr‑hMSCs细胞。本发明通过将8‑羟基喹啉螯合的supgt;89/supgt;Zr(supgt;89/supgt;Zr‑oxine)摄入人骨髓间充质干细胞完成标记，并且通过相关检测，包括supgt;89/supgt;Zr‑oxine进入人骨髓间充质干细胞后的流出率、supgt;89/supgt;Zr‑oxine对人骨髓间充质干细胞的细胞活力、细胞形态、细胞表面标志表达、细胞凋亡、细胞成骨及成脂分化的影响，证明了该方法的可行性，从而实现人骨髓间充质干细胞的体内示踪，帮助分析人骨髓间充质干细胞在生物体内的分布和迁移情况。

技术领域

本发明涉及核医学技术领域，具体涉及一种⁸⁹Zr标记人骨髓间充质干细胞(hMSCs)的方法，特别是使用8-羟基喹啉螯合的⁸⁹Zr标记hMSCs的方法。

背景技术

有研究表明，人骨髓间充质干细胞(hMSCs)来源于中胚层，在一定条件下可以分化成中胚层细胞，如软硬骨细胞、脂肪细胞和肌肉细胞，还可以跨胚层界限分化为外胚层神经元、神经胶质细胞以及内胚层的心肌细胞和肝脏细胞等。其免疫原性低、组织来源广泛、无伦理问题、成瘤风险低，是目前备受关注的一类具有自我复制及多向分化潜能的组织干细胞。众所周知，干细胞治疗需要将干细胞移植到患者体内，因此，确认干细胞在宿主体内的迁移路径对判断干细胞移植的治疗效果至关重要。⁸⁹Zr作为常用的PET核素，半衰期为78.4h，可以连续追踪细胞至少7d，非常适合用来标记细胞。但由于使用⁸⁹Zr-oxine标记间充质干细胞存在较多技术难题，例如(1)干细胞相对于一般细胞较脆弱，在传代及标记的过程中会造成细胞死亡；(2)间充质干细胞增殖较慢，细胞融合后就会开始老化，继而自发分化，且标记及给药需要的细胞量较大，故标记前的细胞准备工作非常困难；(3)标记时需控制放射性剂量和细胞数量的比例，放射性剂量过高会引起细胞死亡；(4)DMSO作为⁸⁹Zr-oxine复合物的溶剂，其本身具有一定细胞毒性，需控制DMSO占反应总体积的比例等，故迄今为止，还未有使用⁸⁹Zr-oxine标记间充质干细胞的报道。提供一种用放射性同位素⁸⁹Zr标记hMSCs的方法，以借助PET实现hMSCs的体内示踪，应有益于帮助分析hMSCs在生物体内的分布和迁移情况。

发明内容

为克服现有技术中缺乏使用⁸⁹Zr-oxine标记hMSCs的方法的缺陷，本发明提供了一种⁸⁹Zr标记hMSCs的方法，通过预先用8-羟基喹啉螯合⁸⁹Zr⁴⁺，然后将8-羟基喹啉螯合的⁸⁹Zr-oxine摄入hMSCs内，完成标记。通过用放射性同位素⁸⁹Zr标记hMSCs，可以借助PET实现hMSCs的体内示踪，帮助分析hMSCs在生物体内的分布和迁移情况。

本发明主要通过以下技术方案解决上述技术问题：

本发明提供的技术方案之一为：一种用放射性同位素⁸⁹Zr标记人骨髓间充质干细胞(hMSCs)的方法，所述方法包括：将待标记的hMSCs与前体⁸⁹Zr-oxine混合、孵育，得到⁸⁹Zr-hMSCs细胞。

在一些优选的实施方案中，所述孵育为室温震荡孵育。

较佳地，所述震荡孵育的转速为300-600rpm。

较佳地，所述震荡孵育的时间为30-120min，优选60min。

作为一种优选的方案，所述前体⁸⁹Zr-oxine的制备包括以下步骤：