[发明专利]线粒体分子标记引物及用于早期鉴定烟草品种种子来源的应用

说明书

本发明涉及线粒体分子标记引物及用于早期鉴定烟草品种种子来源的应用，该分子标记的引物组为：如SEQ ID NO：1和SEQ ID NO：2所记述。该线粒体分子标记引物用于标记烟草保持系/不育系。(1)本发明提供的烟草细胞质雄性不育系sua‑CMS和gla‑CMS特异性分子标记，可以应用于sua型和gla型烟草细胞质雄性不育系的鉴定和分子标记辅助育种。(2)本发明提供的烟草细胞质雄性不育系sua‑CMS和gla‑CMS特异性分子标记，是一种共显性标记，其准确性比显性标记更高。(3)本发明提供的烟草细胞质雄性不育系sua‑CMS和gla‑CMS特异性分子标记应用方法，程序简单，结果稳定可靠，易于规模化应用。

技术领域

本发明属于生物技术领域，尤其是涉及线粒体分子标记引物及用于早期鉴定烟草品种种子来源的应用技术领域。

背景技术

植物细胞质雄性不育(cytoplasmic malesterility,CMS)是由细胞质基因控制的雄蕊发育异常或花粉败育的现象，在作物杂种优势利用中具有重要的作用。细胞质雄性不育系在烟草育种和烟草生产上具有很重要的价值，目前已经有三十多种雄性不育系被开发出来，但其中多数胞质类型对烟草的产量性状或烟叶质量有负面影响。sua-CMS的不育细胞质来源于N.suaveolens，是由烟草和苏云金杆菌体细胞融合得到的，因其对烟草综合性状没有明显的不良影响，目前已成为我国烟草生产中使用最广泛的不育胞质类型。然而生产上使用的不育胞质类型过于单一会造成遗传基础脆弱，生产风险增大。gla-CMS是来源于N.glauca 的另一种不育细胞质，经过胞质效应评价，gla-CMS和可育烟草相比在农艺性状和主要病害抗性方面没有太多显著性差别，具有用于杂交育种和杂交种生产的潜力。

形态学观察是鉴定细胞质雄性不育的重要手段，但存在不能早期鉴定问题。烟草种子的管控非常严格，烟草生产上的种子包含常规种和不育系种子。常规种可以自花授粉，生产种子，下一代能够继续种植。烟草不育系种子是细胞质雄性不育类型，由细胞质基因控制的雄蕊发育异常或花粉败育，无法自交授粉，无种子产生。然而，烟农种植的时候，可能将收获种植的常规种种子，用于下一年度的烟草种植，冒充不育系种子，而在烟草植株开花之前，无法用肉眼辨别该植株的育性情况，因此，严重影响烟草生产双控政策，对烟叶生产的可持续发展发出挑战。

利用分子标记对细胞质雄性不育系进行鉴定可以克服上述问题，具有准确、快速、稳定等优点。CN102199655A公开了一种特异的CAPS标记，可以区分烟草big、gla和sua三种不同的不育细胞质类型，CN113151537A公开了烟草细胞质雄性不育系tab1-CMS的特异分子标记，两者都是针对叶绿体基因组上的特异序列开发的共显性标记。CN108823329A公开了烟草sua-CMS胞质雄性不育系的分子标记，是在线粒体基因组的特异序列上开发的显性标记。目前尚未见到有关鉴定烟草gla-CMS胞质雄性不育系线粒体显性分子标记的技术报道。

发明内容

本发明正是为了解决上述问题缺陷，提供一系列线粒体分子标记引物及用于早期鉴定烟草品种种子来源的应用。

本发明采用如下技术方案实现。

线粒体分子标记引物，本发明该分子标记的引物组为：如SEQ ID NO：1和 SEQ IDNO：2所记述。

本发明上述线粒体分子标记引物在标记烟草保持系/不育系中的应用。

本发明所述的应用包括使用该引物针对烟草保持系进行PCR扩展，扩展出的特异性条带序列为154bp。

本发明所述的应用包括使用该引物对烟草sua-CMS不育系进行PCR扩展，扩展出的特异性条带序列为149bp。

本发明所述的应用包括使用该引物对烟草gla-CMS不育系进行PCR扩展，扩展出的特异性条带序列为162bp。

本发明所述的应用包括使用该引物对烟草保持系K326、HD进行PCR扩展，扩展出的特异序列如SEQ ID NO:5所示。