[发明专利]腹泻性大肠杆菌感染动物模型的构建方法及其应用

说明书

本发明提供一种腹泻性大肠杆菌感染动物模型的构建方法及其应用。所述构建方法为采用腹腔注射腹泻性大肠杆菌菌悬液的方式进行实验动物(小鼠)感染。本发明利用腹泻性大肠杆菌构建的小鼠腹泻模型，可广泛应用于腹泻性大肠杆菌感染诱发的奶牛腹泻病的防控和治疗，以及奶牛肠道健康研究等相关领域，为奶牛大肠杆菌性腹泻病的机制研究提供合适的实验动物模型。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说，涉及一种腹泻性大肠杆菌感染动物模型的构建方法及其应用。

背景技术

腹泻是奶牛常见的一种生理或病理性反应，以水样粪便、迅速脱水和自体中毒为主要症状，是一种危害较大的临床性疾病。奶牛腹泻的诱因主要包括大肠杆菌、轮状病毒、冠状病毒和隐孢子虫等病原微生物，以及营养、环境和饲养管理等外界因素。初生犊牛瘤胃尚未发育完全，免疫系统还不成熟，是奶牛腹泻的易感群体。在对我国45万头后备牛发病情况进行统计后发现，哺乳犊牛阶段发病占比51.4％，其中腹泻病占比高达72.8％。

研究证明，由腹泻性大肠杆菌(diarrheagenic E.coli，DEC)引起的奶牛腹泻病的发病率和死亡率较高，其感染在奶牛中十分普遍，严重危害奶牛养殖业的发展。牛群感染DEC后，主要表现为腹泻、毒血症和结肠炎等临床症状，并能导致继发感染，引起生长迟缓和发育不良。细菌携带的高致病性质粒或毒力基因往往能够编码特定的黏附素、毒素和铁载体等，导致机体免疫系统失衡，尤其DEC感染引起的炎症反应是结肠损伤的关键因素。

当前研究表明结肠炎和奶牛大肠杆菌性腹泻病的发生和发展密切相关。大肠杆菌性腹泻病患牛往往伴有严重的结肠炎症反应，这就论证了结肠炎症反应在奶牛大肠杆菌性腹泻病的发生和发展中的重要作用，但是DEC的致病机制和宿主免疫调控机制依然还不明确。因此，小鼠腹泻性大肠杆菌感染模型的构建为奶牛大肠杆菌性腹泻病的相关机制研究提供了成熟的动物模型。

发明内容

本发明的目的是提供一种腹泻性大肠杆菌感染动物模型的构建方法及其应用。

本发明的另一目的是提供一株新分离腹泻性大肠杆菌，血清型为O101:H9。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供腹泻性大肠杆菌(DiarrheagenicEscherichia coli)--大肠埃希氏菌(Escherichia coli)1587，该菌分离自临床患有大肠杆菌腹泻病的犊牛，能引发奶牛的急性腹泻病。该菌现已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号CGMCC NO.23694，保藏日期2021年10月29日。

该菌的部分生理生化特性如下：乳糖发酵阳性，IMViC试验结果为+、+、-、-。

经16S rDNA测序(SEQ ID NO:1)，根据测序结果以及上述微生物学特征及生理生化特性，将该菌鉴定为腹泻性大肠杆菌。

第二方面，本发明提供所述腹泻性大肠杆菌在构建腹泻性大肠杆菌感染动物模型中的应用。

第三方面，本发明提供一种腹泻性大肠杆菌感染动物模型的构建方法，所述方法包括：配制腹泻性大肠杆菌的菌悬液，菌悬液经腹腔注射给实验动物。

优选地，所述腹泻性大肠杆菌的保藏编号为CGMCC NO.23694。

前述的方法，所述实验动物为小鼠，优选CD-1小鼠。

前述的方法，所述小鼠为出生后35-42天(优选42天)的母鼠。

前述的方法，所述菌悬液中腹泻性大肠杆菌的浓度为5×10⁸～1×10⁹CFU/mL，用PBS溶液进行配制。

进一步地，所述方法包括：给小鼠腹腔注射1mL菌悬液，小鼠可自由采食，充足饮水，于通风干燥条件，饲养18～24h(优选24h)。