[发明专利]一种靶向OGT的特异性鲨鱼单域抗体及其制备方法和应用

说明书

本发明公开了一种靶向OGT的特异性鲨鱼单域抗体及其制备方法和应用。本发明不仅公开了单域抗体的氨基酸序列，同时还公开了其编码基因的核苷酸序列；并且该单域抗体制备方法简单，通过分离免疫斑竹鲨外周血淋巴细胞，提取总RNA，反转录为cDNA；以cDNA为模板，扩增斑竹鲨VNAR片段，与载体连接构建噬菌体文库；从噬菌体文库中淘洗识别OGT的阳性克隆；构建表达载体，诱导表达OGT单域抗体，最终获得靶向OGT的单域抗体。本发明所述的靶向OGT的单域抗体能有效与OGT抗原结合。所述的单域抗体及其编码序列为基于OGT靶点的研究及抗体药物开发提供了研发基础，为肿瘤的诊断和治疗提供了新思路。

技术领域

本发明属于抗体制备领域，特别涉及一种靶向OGT的特异性鲨鱼单域抗体及其制备方法和应用。

背景技术

抗体是生物治疗应用中的重要工具。抗体的类型主要有两种，分别为双链抗体与单链抗体。双链抗体也称为传统抗体(VH)，它的单体是由四条肽链形成的对称结构，主要包括两条轻链和两条重链，重链和轻链之间由二硫键连接形成抗原结合位。传统抗体由于相对分子质量分子大、结构复杂、制备难度大等限制了其生产及在临床应用上的推广。非典型的单链抗体结构，在羊驼、骆驼以及海洋软骨鱼类中被发现。在驼科动物和海洋软骨鱼类中存在着天然缺失轻链的纯重链抗体，其具有分子量小、基因操作方便、组织渗透性强、亲水性高溶解性好、可胞内表达、易改造与表达等特点，能克服传统抗体的不足，并有望成为治疗性抗体的良好来源。

O-连N-乙酰氨基葡萄糖(O-GlcNAc)糖基化是一种广泛存在于蛋白质丝氨酸、苏氨酸残基上的动态、可逆的蛋白质翻译后修饰。在体内，O-GlcNAc动态修饰由N-乙酞氨基葡萄糖转移酶(OGT)和N-乙酞氨基葡萄糖苷酶(OGA)协同完成。OGT为糖蛋白N-糖链加工酶之一，起着决定N-糖链类型及复杂型糖链结构的重要作用。研究表明，乳腺癌、肺癌、结肠癌、前列腺癌等多种不同肿瘤中OGT的表达和O-GlcNAc修饰水平显著增加，OGT介导的糖基化修饰在肿瘤发生中发挥着重要作用。但目前关于靶向OGT的抗体基本上都是以传统的双链抗体为主，但在利用鲨鱼进行单域抗体(VNAR)的制备方面未见报道。因此，开发有效的靶向OGT的鲨鱼单域抗体用于特异性识别OGT的有力工具，对于生物医学基础研究和肿瘤的诊断与治疗具有重要意义。

发明内容

本发明提供了一种靶向OGT的特异性鲨鱼单域抗体及其制备方法和应用。本发明得到了3种特异性针对OGT的单域抗体2D9、3F7和4G2，这些单域抗体具有很好的亲和力和靶向性。

本发明还提供了靶向OGT的特异性鲨鱼单域抗体的编码序列和制备方法及在诊断治疗中的用途。

为实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案予以实现：

本发明提供了一种靶向OGT的特异性鲨鱼单域抗体，所述特异性鲨鱼单域抗体具有下列氨基酸序列之一：

(1)如SEQ ID NO.1所示的氨基酸序列；

(2)如SEQ ID NO.2所示的氨基酸序列；

(3)如SEQ ID NO.3所示的氨基酸序列。

进一步的，所述特异性鲨鱼单域抗体包括框架区FR和互补决定区CDR。

进一步的，所述框架区FR包括FR1、FR2、FR3；所述FR1的氨基酸序列为：VEQTPTTTTKEAGESLTINCVLR；所述FR2的氨基酸序列为：TYWYFTKKGATKKE；所述FR3的氨基酸序列为：SLSNGGRYAETVNKASKSFSLRISDLRVEDSGTYHC。

进一步的，所述互补决定区CDR包括CDR1、CDR3；所述CDR1的氨基酸序列为：DSSCALDS或DSSCALGN；所述CDR1的氨基酸序列为：CKAYTAGYCYTGMG或KARNHLNERCYRD。