[发明专利]一种胰岛素样生长因子-1预处理试剂

说明书

本发明公开了一种胰岛素样生长因子‑1预处理试剂。涉及生物试剂技术领域。包括以下成分：甘氨酸‑盐酸缓冲液，含胰岛素生长因子‑2和Tween‑20的Tris‑NaCl缓冲液。本发明实现在不影响后续IGF‑1和抗体反应的基础上能得到更加准确可靠血清IGF‑1的结果，并实现完全的全自动化。且由两个缓冲液体系组成，具有释放彻底，中性pH条件下进行反应，对后续反应影响小等优点。

技术领域

本发明涉及生物试剂技术领域，更具体的说是涉及一种胰岛素样生长因子-1预处理试剂。

背景技术

胰岛素样生长因子-I(IGF-I)是一种单链多肽，具有3个分子内二硫键。它由70个氨基酸残基组成。它与胰岛素样生长因子-Ⅱ(IGF-Ⅱ)和胰岛素具有结构同源性。在血液循环中的IGF-I和IGF-Ⅱ与胰岛素生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)和酸性不稳定亚基结合，主要以高分子三体聚合物的形式存在。在人体内，生长激素通过肝脏生长激素受体促进肝脏IGF-I基因的表达，从而促进IGF-I的合成和释放；IGF-I反馈抑制垂体生长激素的释放。血清IGF-I的浓度和血清生长激素水平在24小时内大致平行。IGF-I能促进细胞增殖、分化、成熟，并可抑制细胞凋亡，介导生长激素的大部分作用，促进生长和合成代谢，且有降低血糖、调节免疫等作用。另外IGF-I是调节骨细胞功能和代谢的重要因子。IGF-I是介导GH促生长作用的主要物质，血清IGF-I与一类IGF结合蛋白组成复合物，血清浓度相对较稳定，无明显脉冲式分泌及昼夜节律变化，因此，单一血清IGF-I测定值可更好地反映个体GH分泌状态。另外，IGF-I升高反映24小时GH分泌总体水平，可作为巨人症和肢端肥大症治疗是否有效的指标。因为IGF-I与胰岛素生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)和酸性不稳定亚基结合，使得IGF-I的测量变得复杂，所以对样本进行预处理是必要的。

目前IGF-I预处理试剂有以下几种，但都具有相应的技术缺陷。

1)有机溶剂提取法。如使用无水乙醇提取，其原理是通过相似相溶原理，将IGF-I溶解到有机相中，使用离心机离心，获取含有IGF-I的萃取液。在该方法中，IGF-I解离后需要离心，不便于实现自动化操作。

2)强酸法。依赖过低的pH值，使IGFBP-3和酸不稳定蛋白变性或者构象变化，失去与IGF-I的结合能力，从而将IGF-I释放出来。该方法获取的IGF-I溶液为低pH溶液，不利于下一步的IGF-I与IGF-I抗体发生免疫反应。

3)置换法。使用IGF-I类似物对IGF-I进行竞争性的取代替换，将IGF-I从结合的蛋白中替换出来。该方法的缺陷为，置换反应为可逆反应，加入IGF-I类似物无法完全置换IGF-1，从而导致检测结果不准确

因此，如何提供一种胰岛素样生长因子-1预处理试剂是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种胰岛素样生长因子-1预处理试剂。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种胰岛素样生长因子-1预处理试剂，包括以下成分：甘氨酸-盐酸缓冲液，含胰岛素生长因子-2和Tween-20的Tris-NaCl缓冲液。

优选的：甘氨酸-盐酸缓冲液中甘氨酸浓度为0.5～1.5M，盐酸浓度为0.1～0.3M。

有益效果在于：甘氨酸-盐酸缓冲液主要是用来提供酸性环境，pH为2.0-4.0之间，使得IGFBP-3和酸不稳定蛋白变性或者构象变化，失去与IGF-I的结合能力，从而将IGF-I释放出来。

优选的：Tris-NaCl缓冲液中Tris-NaCl浓度为0.2～0.6M；胰岛素生长因子-2浓度为1.0～4.0μg/mL；以所述Tris-NaCl缓冲液总质量计，Tween-20含量为2～4％。

有益效果在于：