[发明专利]一种基于CRISPR-Cpf1的高效基因编辑系统的构建

权利要求书

1.一种基因编辑元件，其特征在于，所述元件包括来源于F.novicida的Cpf1、crRNA和表达载体组成。

2.根据权利要求1所的元件，其特征在于，以pB-Pveg-sfGFP为表达载体。

3.根据权利要求1或2所述的元件，其特征在于，所述Cpf1的核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示。

4.一种基因编辑的方法，其特征在于，利用权利要求1～3任一所述的元件编辑靶向基因。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，将所述Cpf1整合至枯草芽孢杆菌的基因组上，将靶向基因的crRNA整合至表达载体pB-Pveg-sfGFP得到重组表达载体，将重组表达载体转入整合了Cpf1的枯草芽孢杆菌中，得到重组枯草芽孢杆菌，将重组枯草芽孢杆菌在培养体系中培养，实现对靶向基因的敲除或敲入。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述Cpf1整合至木糖启动子下游，基因编辑过程受木糖调控。

7.根据权利要求5或6所述的方法其特征在于，在敲入目的基因并敲除靶向基因时，将靶向基因的crRNA连接至pB-Pveg-sfGFP表达载体，再将目的基因整合至含有靶向基因的crRNA的表达载体构建得到重组表达载体，将重组表达载体转入整合了Cpf1的枯草芽孢杆菌中，得到重组枯草芽孢杆菌。

8.根据权利要求7所述的方法，其特征在于，将所述重组枯草芽孢杆菌在培养基中培养至OD₆₀₀为0.4±0.1，加入木糖诱导表达12～20h。

9.权利要求1～3任一所述元件在基因编辑中的应用。

10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述应用包括但不限于单基因的敲除、多基因的敲除或基因的敲入。