[发明专利]一种酰胺化合物生物传感器的构建及其应用

说明书

本发明公开了一种酰胺化合物生物传感器的构建及其应用，属于生物工程技术领域。本发明提供了一段AmiC‑AmiR突变体的氨基酸基序在检测酰胺类化合物中的应用。本发明通过对RBS进行优化、并将AmiC第83位取代为组氨酸，从而实现了此传感器对于酰胺类物质的响应，并且能检测到摩尔级别的含量，响应范围在0～10mM之间。从而具备良好的应用前景。

技术领域

本发明涉及一种酰胺化合物生物传感器的构建及其应用，具体涉及一种酰胺类物质生物传感器(AmiC-AmiR)氨基酸序列以及表达该传感器所用的RBS、含有编码该氨基酸序列的基因的质粒、转化后含有该质粒的菌株及其在改善酰胺类化合物传感器上的应用，属于生物工程技术领域。

背景技术

酰胺是一类含氮的羧酸衍生物，在构造上，酰胺可看作是羧酸分子中羧基的羟基被氨基或烃氨基(-NHR或-NR2)取代而成的化合物；也可看作是氨或胺分子中氮原子上的氢被酰基取代而成的化合物。主要用作工业溶剂，医药工业上用于生产维生素、激素，也用于制造杀虫脒。丙烯酰胺(Acrylamide)，是一种十分重要的化合物。在工业中，是一种有广泛应用的化工原料，可以用作合成高分子材料的原料，其聚合物具有良好的絮凝、降阻、增稠等特性，可以用作隧道挖掘、石油开采、土壤改良和工业防腐等；在人类健康方面，是一个具有亲电基团的有机小分子，水溶性极强，容易存在于过度烹饪的食物之中，被人体吸收后存在于体内各组织之中，对肌体造成损害。

生物传感器(biosensor)，是一种可以快速响应环境中的目标物质并将其浓度转化为便于辨认的信号，如电信号、颜色等，人们可以根据接收到的信号来判断目标物质的有无以及含量的多少。

丙烯酰胺作为一种无色、无臭的化合物，溶于溶剂中之后很难检测，目前最常用的检测手段就是高效液相色谱，但是这种方法成本比较高，而且耗费时间。此外丙烯酰胺的检测还可以使用比色法，但是这种方法易受其他物质干扰，灵敏度比较低，误差比较严重。同时，其他的酰胺类化合物也和丙烯酰胺存在着同样的问题，检测难度大、对检测的浓度要求高。因此目前还缺少一种可以从复杂环境中高效、准确的检测酰胺类化合物、尤其是丙稀酰胺的手段。

发明内容

针对现有的技术难点及存在的问题，本发明提供了一种来源于铜绿假单胞菌的(Pseudomonas aeruginosa)的转录调节因子AmiC-AmiR的氨基酸基序及其在检测丙烯酰胺的应用。

本发明提供了一种生物传感器，所述生物传感器由转录调节因子AmiC和AmiR组成，所述AmiC是在野生型序列的基础上发生Y83H突变获得的，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，或是将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示序列的第83位进行取代之前的野生型序列。

在一种实施方式中，所述AmiR的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

在一种实施方式中，AmiC和AmiR的RBS序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

本发明提供了一种生物检测系统，所述生物检测系统为向宿主细胞中转入所述生物传感器，构建得到重组菌。

在一种实施方式中，以质粒pVEO为表达载体，所述表达载体上含有AmiC、AmiR和与AmiR结合的抗终止子。

在一种实施方式中，所述AmiC是在其野生型序列的基础上发生Y83H突变获得的，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示，或是将氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示序列的第83位进行取代之前的野生型序列。

在一种实施方式中，在一种实施方式中，所述AmiR的氨基酸序列如SEQ ID NO.2所示。

在一种实施方式中，AmiC和AmiR的RBS序列分别如SEQ ID NO.3和SEQ ID NO.4所示。

在一种实施方式中，AmiR结合的抗终止子的序列如SEQ ID NO.5所示。