[发明专利]一种花生脂氧合酶基因AhLOX29及其克隆与功能表达方法、应用

权利要求书

1.一种花生脂氧合酶基因AhLOX29，其特征在于，所述AhLOX29基因开放阅读框为2754bp，共编码917个氨基酸；所述AhLOX29基因的核苷酸序列如SEQ ID No:1所示，其氨基酸序列如SEQ ID No:2所示。

2.一种如权利要求1所述的花生脂氧合酶基因AhLOX29的克隆与功能表达方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1、材料准备；

S2、PCR扩增获得AhLOX29基因全序列；

S3、构建AhLOX29基因超表达的载体；

S4、农杆菌介导的拟南芥遗传转化、筛选及分子鉴定；

S5、荧光定量PCR对AhLOX29基因表达进行分析；

S6、转基因T2代拟南芥幼苗干旱胁迫处理及表型观察。

3.根据权利要求2所述的一种花生脂氧合酶基因AhLOX29的克隆与功能表达方法，其特征在于，步骤S2中，PCR扩增所述花生脂氧合酶AhLOX29的引物为AhLOX29-F和AhLOX29-R，其中：

AhLOX29-F：5’-TTTGGTACATCTTAAGTCAATAAG-3’，

AhLOX29-R：5’-CTATTCCGGAGTAAGTTTGATT-3’。

4.根据权利要求2所述的一种花生脂氧合酶基因AhLOX29的克隆与功能表达方法，其特征在于，步骤S4中，检测筛选阳性转基因植株的引物为GUS-F和GUS-R，其中，GUS-F：GTGACAAAAACCACCCAAG，

GUS-R：CTTTCTTGTTACCGCCAAC。

5.根据权利要求2所述的一种花生脂氧合酶基因AhLOX29的克隆与功能表达方法，其特征在于，步骤S5中，使用荧光定量RT-PCR对AhLOX29基因干旱下的表达进行分析，所述的AhLOX29基因荧光定量引物序列如下：

AhLOX29-RT-F：5’-CACATAATTAGCCACTTGGACG-3’，

AhLOX29-RT-R：5’-TACGAGTTGCATATGCTTTTCG-3’。

6.根据权利要求2所述的一种花生脂氧合酶基因AhLOX29的克隆与功能表达方法，其特征在于，步骤S5中，AhLOX29基因定量PCR的正向引物序列为：

AhLOX29-RT-F：5’-CACATAATTAGCCACTTGGACG-3’，

AhLOX29-RT-R：5’-TACGAGTTGCATATGCTTTTCG-3’。

7.根据权利要求2所述的一种花生脂氧合酶基因AhLOX29的克隆与功能表达方法，其特征在于，步骤S5中，使用Actin作为RT-PCR的内参基因，所述的内参基因Actin所用引物序列为：

Actin-F:5’-TTGGAATGGGTCAGAAGGATGC-3’，

Actin-R:5’-AGTGGTGCCTCAGTAAGAAGC-3’。

8.根据权利要求1所述的一种花生脂氧合酶基因AhLOX29，其特征在于，所述基因AhLOX29可以提高植物的抗旱性。