[发明专利]一种促进虎斑兜兰种子无菌萌发及成苗的方法

说明书

提供一种促进虎斑兜兰种子无菌萌发及成苗的方法。该方法包括果荚采集与消毒、种子萌发、原球茎分化及生根等步骤。本发明通过优化培养基，在不同的发育阶段设计不同的培养基，建立了虎斑兜兰组培快繁体系，虎斑兜兰的种子萌发率可达80%，成苗率可达94%，移栽半年后成活率可达90.5%。采用该方法，能实现虎斑兜兰的大规模繁殖，对虎斑兜兰种质资源的保护及利用具有重要的意义。

技术领域

本发明属于植物生物技术领域，具件地，涉及兜兰快繁，更具体地，涉及一种促进虎斑兜兰种子无菌萌发及成苗的方法。

背景技术

兜兰属(Paphiopedilum)植物是世界著名的观赏兰花，因其花的唇瓣特化为兜状又被称为拖鞋兰。目前，过度采集和生境丧失使得兜兰属的野生种群数量急剧减少，该属的全部物种均被列入《野生动植物濒危物种国际贸易公约(CITES)》附录I，受到最高等级的保护。种苗繁育技术的解决对种质资源的保护利用具有重要意义。由于缺少胚乳，兰科植物的种子在自然条件下萌发十分困难，通常需要共生真菌为其提供种子萌发所需的营养，自然萌发率不足5％。种子无菌萌发技术和无性克隆技术是兰花主要的种苗人工繁育方式，但兜兰属植物的无性克隆非常困难，目前虽在技术上取得了一些进展，但仍不能投入商业应用。种子无菌萌发技术已经在多种兜兰上取得成功，但是该技术的成苗率在种间的差异极大，有些物种的种子无菌萌发非常困难，如虎斑兜兰(P.tigrinum)。曾宋君等(2011)对多种兜兰进行无菌播种，除虎斑兜兰、秀丽兜兰(P.venustum)外均获得了试管苗，可见虎斑兜兰的种苗繁育之困难。虎斑兜兰是一个商业价值很高的稀有物种，种苗繁育技术的欠缺极大地限制了其规模化的生产栽培及向原生地的回归。攻克虎斑兜兰的种子无菌萌发和成苗技术，将对特色珍稀种质资源的保护及利用具有重要的意义。

发明内容

本发明研发虎斑兜兰从种子无菌萌发、原球茎分化、幼苗继代、壮苗生根等各个阶段最佳的培养基配方，以提高虎斑兜兰的种子萌发率及成苗率，为虎斑兜兰的保护回归和大规模繁殖提供理论支持和技术支撑。

针对现有技术中虎斑兜兰萌发率较低，成苗和生根困难的问题，本发明的目的在于提供一种虎斑兜兰种子无菌萌发及成苗快繁的方法，大大提高了种子萌发率及成苗率。

本发明的上述目的是通过以下技术方案加于实现的：

一种促进虎斑兜兰种子无菌萌发及成苗的方法，该方法包括以下步骤：

(1)果荚采集与消毒：选取虎斑兜兰成熟未开裂的果荚，冲洗后，用0.1％升汞溶液浸泡10～15min，75％乙醇表面灭菌30s，酒精灯略微灼烧果荚后，置于无菌纸上备用；

(2)种子无菌萌发：在无菌纸上，将上述消过毒的果荚切开，均匀的撒于种子萌发培养基表面，种子在13～19天启动萌发，3～6周为种子萌发的高峰期，第7周完成萌发，暗培养2～3个月后，得到白色、健康的原球茎；

(3)原球茎分化：将步骤(2)所得原球茎转入原球茎分化培养基中，转光培后下，原球茎逐渐转绿，培养3～4个月，得到带1～2片叶的小苗；

(4)幼苗继代：将步骤(3)所得带1～2片叶的小苗转入小苗继代培养基中，培养3～4个月，得到带有2～3片叶的小苗；

(5)生根壮苗：将步骤(4)所得带2～3片叶的小苗转入生根壮苗培养基中，培养4～6个月，可得到带4～5片叶、5～7条根、高约4cm的幼苗；

(6)幼苗的移栽：将步骤(5)所得幼苗至于温室条件下炼苗2周，然后将植株从瓶中取出，洗净幼苗根部附着的培养基，将其移入碎树皮基质中培养。

根据一种促进虎斑兜兰种子无菌萌发及成苗的方法，其中步骤(1)中虎斑兜兰果荚冲洗采用肥皂水刷洗、自来水冲洗。