[发明专利]一种鉴别检测PCV2与PCV3病毒的RPA-侧向层析检测方法

权利要求书

1.一种鉴别检测PCV2与PCV3病毒的RPA-侧向层析检测方法，其特征在于：检测试剂包括PCV2上游引物、PCV2探针、PCV2下游引物、PCV3上游引物、PCV3探针、PCV3下游引物、样品垫和NC膜，所述NC膜由抗FITC抗体和抗地高辛抗体组成的T1检测线和T2检测线，由小鼠抗链霉亲和素抗体组成的C线。

2.根据权利要求1所述的一种鉴别检测PCV2与PCV3病毒的RPA-侧向层析检测方法，其特征在于：所述PCV2与PCV3上游引物序列为：

PCV2上游引物5'-CTACATTTCCAGTAGTTTGTAGTCTCAGCC-3'

PCV3上游引物5'-CCTCTTCGGGTACCAGATCGGATCTTCAAG-3'。

3.根据权利要求1所述的一种鉴别检测PCV2与PCV3病毒的RPA-侧向层析检测方法，其特征在于：所述PCV2与PCV3下游引物5'端标记为为生物素修饰，且PCV2与PCV3下游引物分别为：

PCV2下游引物Biotin-5'-CATAACCCAGCCCTTCTCCTACCACTCCCGC-3'

PCV3下游引物Biot i n-5'-CAAATGGAACCCACCCATAAAAATCATCCAG-3。

4.根据权利要求1所述的一种鉴别检测PCV2与PCV3病毒的RPA-侧向层析检测方法，其特征在于：所述PCV2探针为FITC修饰，PCV3探针为地高辛修饰；

PCV2探针：

FITC-TGATTTCTTTTGTTGTTTGGTTGGAAGTAAT(THF)CAATAGTGGAATCTAGGAC-C3Spacer；

PCV3探针：

Dig-GAAGTTGCGGAGAAGATGCCTGCAGTATTTA(THF)TACGCTATGGGCGGG-C3Space r。

5.根据权利要求1所述的一种鉴别检测PCV2与PCV3病毒的RPA-侧向层析检测方法，其特征在于：所述PCV2的扩增产物里，5'端标记有FITC，3'端标记有生物素，所述PCV3的扩增产物里，5'端标记有地高辛,3'端标记有生物素，所述扩增产物加到侧向层析试纸条样品垫上形成金标复合物，且金标复合物由PCV2、PCV3扩增产物的3'端生物素与金标链酶亲和素结合组成。

6.根据权利要求1所述的一种鉴别检测PCV2与PCV3病毒的RPA-侧向层析检测方法，其特征在于：所述侧向层析试纸条中样品垫上包含胶体金颗粒标记的链霉亲和素。

7.根据权利要求1所述的一种鉴别检测PCV2与PCV3病毒的RPA-侧向层析检测方法，其特征在于：所述的NC膜上包含由抗FITC抗体和抗地高辛抗体组成的T1检测线和T2检测线，由小鼠抗链霉亲和素抗体组成的C线。

8.一种鉴别检测PCV2与PCV3病毒的RPA-侧向层析检测步骤，其特征在于：包括如下步骤：

Sp1：待测样品DNA提取：提取待测样品基因组DNA，回收保存；

Sp2：RPA扩增：以待测样品的DNA为模板，将PCV2盒PCV3的引物探针加入到RPA扩增反应液中，进行RPA扩增；

Sp3:扩增产物检测：将扩增产物稀释后滴在侧向层析试纸条上，待反应5-10分钟，根据显色条带进行结果判定。