[发明专利]重组蛋白结构域增强TET酶及全基因组DNA甲基化检测方法有效
| 申请号： | 202111477604.1 | 申请日： | 2021-10-18 |
| 公开（公告）号： | CN114195902B | 公开（公告）日： | 2023-06-20 |
| 发明（设计）人： | 侯策;韦磊;江翱;陈晶晶;黄开瑜;滕以刚;曹振;宋东亮 | 申请（专利权）人： | 翌圣生物科技（上海）股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K19/00 | 分类号： | C07K19/00;C12N9/10;C12Q1/6886;C40B50/06 |
| 代理公司： | 苏州根号专利代理事务所(普通合伙) 32276 | 代理人： | 朱华庆 |
| 地址： | 200120 上海市浦*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 重组 蛋白 结构 增强 tet 基因组 dna 甲基化 检测 方法 | ||
1.一种增强TET酶，其特征在于：为在序列如SEQ ID No.6所示的mTET1CD蛋白的氨基端通过GGGS连接肽连接如SEQ ID No.1-4中任一项所示的重组蛋白结构域。
2.一种构建全基因组DNA甲基化检测文库的方法，其特征在于其步骤包括：
（1）采用权利要求1所述的增强TET酶对模板DNA进行氧化；
（2）还原剂处理，碱中和；
（3）DNA回收，回收产物构成全基因组DNA甲基化检测文库。
3.根据权利要求2所述的构建全基因组DNA甲基化检测文库的方法，其特征在于：步骤（1）中所述的氧化反应的反应温度为10-40℃。
4.根据权利要求2所述的构建全基因组DNA甲基化检测文库的方法，其特征在于：步骤（1）中所述的氧化反应的反应时间为0.5-2 h。
5.根据权利要求2所述的构建全基因组DNA甲基化检测文库的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的还原剂包括氢化铝锂、氢化硼锂、醋酸硼氢化钠、氰基硼氢化钠、二异丁基氢化铝、三乙基硼氢化锂、氨硼烷、吡啶硼烷、2-甲基吡啶硼烷、硼氢化钠、氨硼烷锂、吡咯烷并硼氢化锂、硼烷乙二胺、硼烷二甲胺、硼烷吗啉络合物、硼烷三苯基膦、硼烷二苯基膦、硼烷三乙胺、4-甲基吗啉硼烷、硼烷三甲胺络合物、5-乙基-2-甲基吡啶硼烷、N,N-二异丙基乙胺硼烷、硼烷四氢呋喃络合物、硼烷二甲基硫醚络合物中的一种或多种。
6.根据权利要求2所述的构建全基因组DNA甲基化检测文库的方法，其特征在于：步骤（2）中还原剂的处理浓度为100-2000 mM。
7.根据权利要求2所述的构建全基因组DNA甲基化检测文库的方法，其特征在于：步骤（2）中还原剂的处理温度为20-50℃。
8.根据权利要求2所述的构建全基因组DNA甲基化检测文库的方法，其特征在于：步骤（2）中还原剂的处理时间为2-24 h。
9.根据权利要求2所述的构建全基因组DNA甲基化检测文库的方法，其特征在于：步骤（2）中所述的碱中和使用的是氢氧化钠或氢氧化钾，在反应体系中的终浓度为0.5-1.5 M。
10.根据权利要求2所述的构建全基因组DNA甲基化检测文库的方法，其特征在于：步骤（3）中所述的DNA回收方式指磁珠法回收、柱法回收或抽提沉淀法回收。
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