[发明专利]一株贝莱斯芽孢杆菌菌株HT-9及其应用

说明书

本发明涉及一株贝莱斯芽孢杆菌菌株HT‑9及其应用，可有效解决花生白绢病害的用药问题，其解决的技术方案是，本发明所述的贝莱斯芽孢杆菌HT‑9，其分类命名为贝莱斯芽孢杆菌（Bacillus velezensis），已保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.22072，保藏日期为2021年3月25日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，该菌株的16S rDNA基因序列如SEQ ID No.1所示。本发明贝莱斯芽孢杆菌菌株HT‑9能有效抑制白绢病菌生长，且本发明将贝莱斯芽孢杆菌菌株HT‑9与双黄连药渣结合并取得了显著效果，这为花生白绢病的防治提供了一种新思路。

技术领域

本发明涉及微生物技术领域，特别是一株贝莱斯芽孢杆菌菌株HT-9及其应用。

背景技术

花生是我国四大油料作物之一，产量位居全球第一，是我国净出口创汇农作物品种之一。近年来我国花生种植面积不断扩大，受气候、品种及栽培管理方式等因素影响，花生白绢病的发生逐年加重，成为制约我国花生产量和品质的重要因素。花生白绢病是世界范围内花生上普遍发生的一种重要土传真菌病害，其病原菌是Sclerotium rolfsiiSacc.。花生各个生育期均可受白绢病菌侵染，主要为害植株茎部、果柄及荚果。受害茎基部组织腐烂、皮层脱落，剩下纤维状组织，植株叶片变黄、边缘焦枯，最后枯萎。我国花生白绢病研究起点晚、研究力量比较薄弱，病害系统研究不够深入，还缺少有效的防控措施。目前对花生白绢病的防治方法主要以培育抗性品种和使用化学药剂为主，但防治效果都不理想。同时化学药物的大量使用不仅使病原菌逐渐产生了抗药性，且化学农药残留对人类和生态造成严重的威胁。因此，寻找一种经济、安全、有效的生物防治措施迫在眉睫。

双黄连是中国药典收载的中成药，成分为金银花、黄芩、连翘3味中药，具有清热解毒、轻宣透邪之功效。双黄连药渣是指生产双黄连过程中产生的药渣部分，产量较大，新冠肺炎疫情后双黄连产量及产生的药渣更多。大部分从事中药生产的企业，在中药药渣的处理上很不环保，比如直接焚烧、露天堆放、填埋等，对我们的周边生活环境造成严重的污染。由于中药植物细胞壁的主要成分纤维素严重阻碍存在于植物细胞质中的有效药物成分的析出，很多医药企业对中药有效成分提取率较低。如双黄连药渣中还含有大量的有效成分，如蛋白质、黄芩苷、绿原酸、连翘苷等，有很高的再利用价值。目前关于利用双黄连药渣防治花生白绢病害的研究还未见报道。

发明内容

针对上述情况，为解决现有技术之缺陷，本发明之目的就是提供一株贝莱斯芽孢杆菌菌株HT-9及其应用，可有效解决花生白绢病害的用药问题。

本发明解决的技术方案是，本发明所述的贝莱斯芽孢杆菌HT-9，其分类命名为贝莱斯芽孢杆菌(Bacillus velezensis)，已保藏于中国普通微生物菌种保藏管理中心，保藏编号为CGMCC No.22072，保藏日期为2021年3月25日，保藏地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，该菌株的16S rDNA基因序列如SEQ ID No.1所示。

利用上述贝莱斯芽孢杆菌HT-9生产的生防菌剂在防治花生白绢病中的应用，所述的生防菌剂为固体制剂，吸附载体为双黄连药渣，活性成分为HT-9菌体。

上述生防菌剂的制备方法包括以下步骤：

1)将活化后的HT-9菌种接入牛肉膏蛋白胨液体培养基中，于30℃、200r/min条件下摇培3d，得HT-9发酵液，备用；

2)将双黄连药渣粉碎后过30目筛，得双黄连药渣粉，121℃高压蒸汽灭菌2h后，自然晾干后备用；所述的双黄连药渣由生产双黄连时残留的金银花药渣、黄芩药渣、连翘药渣混合组成，比例为1:1:2；

3)将贝莱斯芽孢杆菌HT-9发酵液与双黄连药渣粉按照固液比为1:1的比例混合，搅拌均匀，常温干燥，即为生防菌剂。