[发明专利]一种特异性靶向星形胶质细胞的重组腺相关病毒及其应用在审

申请号：	202111486070.9	申请日：	2021-12-07
公开（公告）号：	CN114292876A	公开（公告）日：	2022-04-08
发明（设计）人：	林坤章;韩增鹏;骆能松;徐富强	申请（专利权）人：	中国科学院深圳先进技术研究院
主分类号：	C12N15/864	分类号：	C12N15/864;C12N15/65
代理公司：	北京市诚辉律师事务所 11430	代理人：	范盈;李玉娜
地址：	518055 广东省深圳***	国省代码：	广东;44
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摘要：
搜索关键词：	一种特异性靶向星形胶质细胞重组相关病毒及其应用
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【说明书】：

本发明公开了一种靶向星形胶质细胞的重组腺相关病毒及其应用，所述重组腺相关病毒的骨架为pAAV2/11，由腺相关病毒核心质粒、重组腺相关病毒包装质粒和腺病毒元件辅助质粒共转染包装细胞系获得，所述重组腺相关病毒核心质粒包含两端反向末端重复序列ITR、GfaABC1D启动子、外源基因、转录调节元件WPRE和转录终止序列SV40polyA，所述重组腺相关病毒包装质粒包括2型腺相关病毒的Rep基因和11型腺相关病毒的Cap基因。本发明首次将pAAV2/11作为基因转移载体实现星形胶质细胞的特异性靶向，为神经科学研究、疾病模型建立和基因治疗等提供了更好的工具和技术支撑，具有广泛的应用价值和市场前景。

技术领域

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种特异性靶向星形胶质细胞的重组腺相关病毒及其应用。

背景技术

大脑网络由各种各样的神经细胞组成，神经细胞主要包括神经元和胶质细胞(neuroglia)两大类，分别在大脑中扮演不同的角色。神经胶质细胞的数量比神经元多几十倍，一般可分为小胶质细胞、星形胶质细胞以及少突胶质细胞等。随着神经科学的发展，人们发现不同类型的神经细胞具有不同的网络结构连接与功能，其发生变异可引起不同的大脑疾病和行为障碍。越来越多的证据表明星形胶质细胞跟各种脑疾病相关(Nature.2014；509(7499):189-194.)。因此，有必要开发特异性靶向星形胶质细胞的工具，用于解析星形胶质细胞的结构与功能，为脑疾病的治疗提供理论依据和技术支撑。

目前，科研工作者对星形胶质细胞的解析主要依赖于转基因动物。然而，转基因动物，如小鼠、大鼠、狗、猪和猴子等，具有繁殖周期长、饲养成本高以及不能灵活地携带目的基因进行神经细胞的操控与疾病的治疗。因此，继续发展能够特异性靶向星形胶质细胞的方法具有十分重要的意义。

发明内容

为了解决现有技术中的不足，本发明的目的是提供一种特异性靶向星形胶质细胞的重组腺相关病毒及其应用。

本发明第一方面提供一种重组腺相关病毒核心质粒，其包含两端反向末端重复序列ITR、GfaABC1D启动子、外源基因、转录调节元件WPRE和转录终止序列SV40polyA。

进一步地，所述外源基因包括报告基因；

优选地，所述报告基因为EGFP。

进一步地，所述重组腺相关病毒核心质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO：3所示。

本发明第二方面提供一种重组腺相关病毒载体系统，包括所述的腺相关病毒核心质粒、重组腺相关病毒包装质粒和腺病毒元件辅助质粒。

进一步地，所述重组腺相关病毒包装质粒包括2型腺相关病毒的Rep基因和11型腺相关病毒的Cap基因；

优选地，所述重组腺相关病毒包装质粒以pAAV-RC2/1为骨架；

优选地，所述腺病毒元件辅助质粒为pAd-Helper。

进一步地，所述重组腺相关病毒包装质粒的核苷酸序列如SEQ ID NO：4所示。