[发明专利]用于检测25-羟基维生素D含量的解离剂及其制备方法

说明书

本发明公开了一种用于检测人血液样本中25‑羟基维生素D含量的解离剂，由EDTA二钠、二甲基乙醇胺、二甲基甲酰胺、异硫氰酸胍、全氟辛酸和缓冲液组成；所述缓冲液为磷酸盐缓冲液。上述技术方案中用于血液样本检测的维生素D的解离剂，解离充分，解决了国产25‑羟基维生素D检测试剂盒灵敏度低于进口试剂盒的问题，检测结果准确，测定值CV小，操作简单，反应时间短，释放彻底，加入样本后1‑2分钟即可解离，且中性缓冲液不影响解离后的免疫反应，可匹配快速检测试剂盒的应用；保证了对血清中25‑羟基维生素D浓度的精确检测。

技术领域

本发明涉及检测试剂盒技术领域，具体涉及一种用于检测人血液样本中25-羟基维生素D含量的解离剂及其制备方法。

背景技术

在临床实践中，25-羟基维生素D的血清水平被认为是维生素D状态的主要指标，维生素D是参与许多人体和动物体生物学过程的重要物质。维生素D的缺乏会导致严重的疾病，如骨质疏松和软骨病。过量的维生素D具有毒性，影响肠道钙吸收，引发高钙血症，还有高血压，胃肠问题等。通过测量或定量维生素D，即确定其浓度，可以确认潜在的缺陷或过量，做好疾病防控。

目前VD解离剂有以下几种，但都具有相应的技术缺陷。

（1）强酸强碱法，通过过高或者过低的pH值，使维生素D结合蛋白变性或者发生构象的变化，从而失去与维生素D的结合能力，释放出来，但该方法获取的维生素D缓冲液由于pH问题不利于下一步与VD抗体的免疫反应；

（2）蛋白酶水解法，向样本中加入蛋白酶，使维生素D结合蛋白水解，释放维生素D。但该方法的缺陷为水解时间过长，违背了快速检测试剂盒开发的初衷；

（3）有机溶剂溶解法，利用相似相溶的原理，使用乙醇或乙腈提取沉淀蛋白，除去沉淀，回收含有待测25-羟基维生素D的上清液进行检测，但是该方法不能通过自动化完成，检测误差也较大；

因此，有必要研发出一种操作简单、解离充分且效果佳的用于检测人血液样本中25-羟基维生素D含量的解离剂。

发明内容

本发明要解决的技术问题是，提供一种用于检测人血液样本中25-羟基维生素D含量的解离剂，能够实现解离25-羟基维生素D时反应时间短，释放彻底，能够在中性pH条件下进行反应。

为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案是，该用于检测人血液样本中25-羟基维生素D含量的解离剂，由EDTA二钠、二甲基乙醇胺、二甲基甲酰胺、异硫氰酸胍、全氟辛酸和缓冲液组成；

所述缓冲液为磷酸盐缓冲液。

上述技术方案中用于血液样本检测的维生素D的解离剂，解离充分，解决了国产25-羟基维生素D检测试剂盒灵敏度低于进口试剂盒的问题，检测结果准确，测定值CV小，操作简单，反应时间短，释放彻底，加入样本后1-2分钟即可解离，且中性缓冲液不影响解离后的免疫反应，可匹配快速检测试剂盒的应用；保证了对血液中25-羟基维生素D浓度的精确检测。

优选的，所述磷酸盐缓冲液的浓度为20mM，其中，溶解于所述磷酸盐缓冲液中的EDTA二钠、二甲基乙醇胺、二甲基甲酰胺、异硫氰酸胍和全氟辛酸的质量体积比分别是0.5%-1%、0.8%-1%、0.8%-1%、0.5%-1%和0.5%-1%。

优选的，溶解于所述磷酸盐缓冲液中的EDTA二钠、二甲基乙醇胺、二甲基甲酰胺、异硫氰酸胍和全氟辛酸质量体积比分别是0.5%、0.8%、0.8%、0.5%和0.5%。

本发明要解决的另一个技术问题是提供一种用于检测人血液样本中25-羟基维生素D含量的解离剂的制备方法，包括以下步骤：

S1：配制20mM磷酸盐缓冲液，pH 为7.4；

S2：取EDTA二钠，异硫氰酸胍，溶解于磷酸盐缓冲液中，调节pH 为7.4；