[发明专利]一种促甲状腺激素受体抗原试剂及促甲状腺激素受体抗体定量检测试剂盒

说明书

本发明提供了一种人促甲状腺激素受体抗体定量检测试剂盒，包括：包被有抗TSHR单克隆抗体A的固相载体；抗原试剂，所述抗原试剂为抗TSHR单克隆抗体B和TSHR的免疫复合物；含有标记物标记的人刺激性促甲状腺激素受体抗体；所述抗TSHR单克隆抗体A与抗TSHR单克隆抗体B不产生竞争性结合。本发明提供的试剂盒采用竞争法反应原理检测血清或血浆中促甲状腺激素受体抗体的浓度，试剂盒较为稳定，且能够避免生物素或荧光素钠的干扰，制备工艺更简单稳定，重复性良好，在提高产品性能的同时，大大降低了成本。

技术领域

本发明涉及体外诊断技术领域，具体是一种促甲状腺激素受体抗原试剂及促甲状腺激素受体抗体定量检测试剂盒。

背景技术

促甲状腺激素受体(TSHR)是位于甲状腺滤泡上皮细胞膜上的一种大分子糖蛋白，属于G蛋白偶联受体家族成员。生理条件下，促甲状腺激素(TSH) 与其受体TSHR结合，经G蛋白激活产生级联反应以实现生物学效应。在遗传和环境作用下，TSHR结构发生变异，产生了抗原性，引起自身免疫反应，产生大量的促甲状腺激素受体抗体(TRAb)。TRAb是一组异质性抗体，根据其功能不同可分为甲状腺刺激抗体(TSAb)、甲状腺刺激阻断抗体(TSBAb) 和中性甲状腺激素受体抗体。TSAb可与TSH竞争性结合在TSHR上，通过产生cAMP，刺激甲状腺滤泡细胞分泌合成甲状腺素，继而可引起毒性弥漫性甲状腺肿(Graves病)。TSBAb与TSHR结合，可直接干扰TSH与其受体的结合，从而减弱TSH的生物学效应。另外，TSBAb还可抑制腺苷酸环化酶的活化引起甲减。中性抗体与TSHR结合后既不刺激也不抑制甲状腺功能。

TSHR由含764个氨基酸的单一多肽链组成，分子量约为84kDa，胞外域大约有414～418个氨基酸，包含六个潜在的N连接糖基化位点，而剩余的序列形成跨膜结构域和细胞内羧基末端。正确的折叠、糖基化和存在TSHR的跨膜区和胞外域是高亲和力配体结合所必需的，同时，跨膜区和细胞内结构的稳定对于维持TSHR的稳定有重要作用。有大量文献表明TSHR本身稳定性很差(参考文献1：Furmaniak J,Sanders J,Sanders P,Miller-GallacherJ,Ryder MM,Rees Smith B.Practical applications of studies on the TSH receptorand TSH receptor autoantibodies.Endocrine.2020May；68(2):261-264.doi: 10.1007/s12020-019-02180-9.Epub 2020May 29.PMID:32472423；PMCID: PMC7266850.参考文献2：Iida Y,Amir SM,Ingbar SH.Stabilization,partial purification,andcharacterization of thyrotropin receptors in solubilized guinea pig fat cellmembranes.Endocrinology.1987Nov；121(5):1627-36.doi: 10.1210/endo-121-5-1627.PMID:3665836.)。在体外诊断检测技术领域中，检测试剂在液体状态下长期保存是其能在自动化检测仪器中正常使用的必要条件，而TSHR稳定性差，易失去活性，很难在2-8℃条件下长期保存，因而限制了其在自动化监测仪器上的应用。

TRAb是Graves患者血清中存在对TSHR的特异性自身抗体。血清TRAb 的测定可以作为Graves病诊断、治疗及预后判断的良好指标，对妊娠期甲状腺功能亢进症的治疗以及新生儿甲状腺功能异常的风险评估也具有重要价值。目前TRAb的检测方法主要有生物分析法和免疫分析法。生物分析法能区分刺激性抗体和阻断性抗体，但因耗时、操作繁琐，成本高而不能应用于临床实验室的检测。常见的免疫分析法为放射免疫法、酶联免疫法、化学发光法，目前临床应用最广泛的为全自动磁微粒化学发光法。