[发明专利]一种可实现肿瘤靶向传递和穿膜效应的FA/TAT-GNS纳米探针及其制备方法和应用

权利要求书

1.一种可实现肿瘤靶向传递和穿膜效应的FA/TAT-GNS纳米探针的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

S1：以球状银纳米颗粒为模板，利用胶体银与氯金酸的瞬时置换反应制备中空刺突状的金纳米结构；

S2：利用叶酸(FA)中的羧基和HS-PEG5K-NH₂中氨基的EDC–NHS反应，将FA共价交联在HS-PEG5K-NH₂尾端，制备巯基聚乙二醇交联的叶酸功能分子，即HS-PEG5K-FA；

S3：将TAT(CGGYGRKKRRQRRR)、HS-PEG5K-FA和HS-PEG5K-OMe(甲氧基末端的巯基聚乙二醇)按一定摩尔比例分别加入步骤S1中新鲜制备的金纳米颗粒分散液，利用巯基与金原子共价连接形成Au-S键的作用，在金纳米颗粒的表面同时共价偶联几种功能分子，得多功能化的金纳米探针，即FA/TAT-GNS；

S4：选取特定的肿瘤细胞，将步骤S3制备的金纳米探针进行靶向性验证和摄取率对比试验。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S1具体包括：

S11:采用柠檬酸钠还原法制备胶体银纳米颗粒。取新配制的硝酸银水溶液加入超纯水，保持剧烈搅拌，煮沸后迅速加入柠檬酸钠溶液，继续煮沸一段时间，冷却至室温，即制得柠檬酸钠包覆的胶体银纳米颗粒；

S12:将新配制的氯金酸储备液加入超纯水稀释并定量，紧接着，取新制备的胶体银纳米粒子经离心、洗涤、重悬后逐滴加入稀释后的氯金酸水溶液中，立即混匀，溶液颜色由亮黄色迅速变为浅灰色，紧接着加入抗坏血酸溶液，混合均匀，静置片刻，溶液颜色由浅灰色终变为深蓝色，即得中空内核及表面刺突状的金纳米材料。

3.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2具体包括：首先，将叶酸中的羧基进行活化，即将一定比例的叶酸、1-乙基-3-(3-三甲氨丙基)碳二亚胺(EDC)和N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)充分溶解于二甲基亚砜中，混合均匀得混合液；将该混合液在室温黑暗条件下，剧烈搅拌反应1.5小时；将HS-PEG5K-NH₂加入上述反应混合液，使氨基与经活化的叶酸分子反应，室温避光搅拌过夜，该混合溶液经透析、离心、收集上清液、冷冻干燥，得粉末状的巯基聚乙二醇偶联的叶酸功能分子，即HS-PEG5K-FA。

4.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述步骤S2中FA、EDC、NHS的反应摩尔比例为1：10：20。

5.由上述任一权利要求所述方法制备的可实现肿瘤靶向传递和穿膜效应的FA/TAT-GNS纳米探针。

6.权利要求5中所述FA/TAT-GNS纳米探针在制作肿瘤检测设备或治疗设备中的应用。