[发明专利]念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒及其制备方法

说明书

念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒及其制备方法，涉及检测试剂盒领域；包括检测卡，所述检测卡包括底板、加样板、乳胶结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸，所述加样板、乳胶结合垫、硝酸纤维素膜和吸水纸依次首尾连接并固定于所述底板上，所述乳胶结合垫固定有第一乳胶微球标记的念珠菌/毛滴虫/加德纳菌特异性抗体和第二乳胶微球标记的链霉亲和素，所述硝酸纤维素膜设有包被念珠菌/毛滴虫/加德纳菌抗体的检测线和包被生物素‑BSA的质控线。本发明的检测试剂盒，仅需一次取样及样本处理过程的条件下，同时完成念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌的抗原联合检测，效率高，且特异性强，灵敏度高。

技术领域

本发明属于检测试剂盒领域，具体涉及念珠菌/阴道毛滴虫/阴道加德纳菌抗原联合检测试剂盒及其制备方法。

背景技术

念珠菌性阴道炎是最常见的女性阴道炎之一，主要由念珠菌(Candida albicans,CA)感染引起，念珠菌(Candida albicans，C.albicans)也称白色假丝酵母菌，隶属于念珠菌属。由念珠菌感染引起的外阴阴道炎症，即妇女外阴最常见的炎症之一。它与抗生素滥用、免疫缺陷、妊娠、激素治疗以及难治性糖尿病密切相关。

阴道毛滴虫(Trichomonas vaginalis，T.vagnialis)是寄生在人体泌尿生殖道的一种常见病原体，可引起阴道毛滴虫病。滴虫是最常见的非病毒的性病，它与许多围产期并发症，男性和女性生殖道感染和传播艾滋病毒的发病率增加有关。

加德纳菌(Gardnerella vaginal，G.vagnialis)是一类革兰染色阴性或阳性的短杆菌，是女性细菌性阴道病(bacterial vaginosis，BV)的主要病原菌之一。它与不良妊娠结局、妇科炎症和艾滋病毒的传播复制有关。

现有技术中念珠菌、阴道毛滴虫和阴道加德纳菌存在以下缺点：

1、念珠菌检测方法

念珠菌的实验室检测主要检测念珠菌病原体、代谢产物、抗原、抗体以及核酸等。其检查方法包括：白带外观和pH检测、显微镜镜检、培养法、生化酶学法、免疫学方法及分子生物学方法等。

(1)白带外观及pH检测：念珠菌阴道炎患者白带为白色豆腐渣样分泌物，呈凝乳状。而正常白带的颜色像鸡蛋清一样，清亮无色或白色、不均匀、絮状。如果是单纯的念珠菌感染，对于有经验的医师白带外观检查的方法可以确诊，但是如果是混合感染则不能达到诊断目的。正常白带的pH值在3.8～4.4，这样的环境有利于乳酸杆菌生长，而乳酸杆菌代谢阴道壁脱落的鳞状上皮细胞糖原成分产酸，又有利于阴道内环境的稳定。而念珠菌阴道炎患者白带pH值变化不明显，一般保持在4.0～4.5。这样的pH值变化仅有助于初步排除滴虫或BV感染，而无助于念珠菌阴道炎的直接诊断。

(2)显微镜镜检：通过显微镜镜检白带涂片也是临床上比较常见的念珠菌实验室检测方法，以见到假菌丝和(或)孢子为阳性，具体有以下几种：

1)生理盐水湿片法：是目前临床上常用的念珠菌阴道炎检测方法，该法不染色，操作简便快速。但由于阴道分泌物涂片有大量的上皮细胞和正常菌群的微生物，合并感染时还有大量的脓细胞，在杂乱的背景下，无经验者难以辨认，容易造成假阴性，因此灵敏度比较低。国内资料报道从14.9％到54.0％不等。

2)染色法：包括革兰氏染色、刚果红染色和PAS染色。通过染色念珠菌形态典型、突出，加之使用油镜，放大倍数高，易于与干扰物质区别，因此染色法虽与生理盐水湿片法的特异性无明显差别，但灵敏度得到提高。国外报道对有症状的患者检出率为65％～68％，而国内报道偏低，从23.14％到64.0％不等。

3)10％KOH悬滴法：由于KOH降解分泌物中的一些糖蛋白，使假菌丝和孢子更容易观察，因此提高了检测的灵敏度。但是会漏检90％无症状的念珠菌患者。

显微镜镜检检测念珠菌阴道炎虽然操作简单，不费时，但是灵敏度存在一定的问题。