[发明专利]一种沉默人LINC01614表达的shRNA分子及其应用

说明书

一种沉默人LINC01614表达的shRNA分子及其应用，属于生物医学技术领域。本发明一方面提供了一种沉默人LINC01614表达的shRNA分子的靶标基因，另一方面提供了一种沉默人LINC01614表达的shRNA分子及其应用。本发明得到的shRNA分子能够干扰LINC01614表达，从而降低肿瘤细胞的迁移和侵袭能力，抑制EMT分子表达，并于体内动物模型中抑制肿瘤形成和肺转移。本发明为乳腺癌的靶向治疗提供新的方案。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种沉默人LINC01614表达的shRNA分子及其应用。

背景技术

乳腺癌是一种多见的恶性肿瘤，因其高发病率而位居女性癌症首位。近年来我国女性乳腺癌发病率呈逐年上升趋势且逐渐年轻化，抗肿瘤治疗方法的发现和发展虽一定程度上提高了肿瘤患者的生存率和生活质量，然而接受肿瘤药物治疗的患者通常会产生明显的耐药性，导致疗效降低、肿瘤复发、转移，最终导致治疗失败。乳腺癌的侵袭转移是一个多因素、多步骤的复杂过程，受到多种基因的表达调控，其具体的分子机制目前尚不完全清楚。

LncRNA是一类长度大于200nt的不具备编码蛋白质能力的功能性RNA分子，参与调控细胞内多种生物学过程。现已有上千种LncRNA参与调控哺乳动物基因表达，在多种恶性肿瘤中均有LncRNA异常表达的报道，其对人类疾病进程的影响越来越突出。LINC01614作为一种新的肿瘤诊断和预后指标，有团队研究发现LINC01614的高表达与细胞粘附信号通路中多个基因呈正相关，并与上皮-间质转化(Epithelial-Mesenchymal Transition,EMT)相关，影响多种癌症的转移和预后。在公共数据库中可查询到其在多种癌症中均高表达，包括乳腺癌、非小细胞肺癌、胃癌、胶质瘤等，提示其与肿瘤的发生发展密切相关，但迄今为止有关LINC01614的文献报道并不多见。

RNA干扰(RNA interference，RNAi)是机体内广泛存在的一种双链RNA介导的序列特异性基因沉默现象，因其可特异性剔除或关闭特定基因的表达而被广泛应用于探索基因功能和传染性疾病及恶性肿瘤的治疗领域。其中，短发卡RNA(short hairpin RNA，shRNA)是一段具有茎环结构的外源性RNA序列，能够在细胞内加工成siRNA，siRNA进而与蛋白质结合形成RNA诱导沉默复合物(RNA-inducedsilencing complex，RISC)结合到同源的mRNA上并诱导其降解。shRNA的作用具有严格的靶向性，特异性靶位点的选择具有位置效应，不同的靶位点对同一基因的干扰效率有着很大的差异。

本发明构建了特异性沉默LINC01614的shRNA，所述shRNA转入肿瘤细胞后，有效抑制了肿瘤细胞的转移和侵袭，并抑制了EMT相关分子的表达，为进一步深入探索LINC01614在乳腺癌转移侵袭方面的分子机制提供应用基础。

发明内容

针对现有技术存在的问题，本发明的目的在于设计提供一种沉默人LINC01614表达的shRNA分子及其应用的技术方案。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明一方面提供了一种沉默人LINC01614表达的shRNA分子的靶标基因，所述沉默人LINC01614表达的shRNA分子靶标基因如SEQ ID N0.1和SEQ ID N0.2所示。

本发明另一方面提供了一种沉默人LINC01614表达的shRNA分子，包括shRNA-1和/或shRNA-2，所述shRNA-1的正义链核苷酸序列如SEQ ID N0.3所示，所述shRNA-1的反义链核苷酸序列如SEQ ID N0.4所示，所述shRNA-2的正义链核苷酸序列如SEQ ID N0.5所示，所述shRNA-2的反义链核苷酸序列如SEQ ID N0.6所示。

本发明另一方面提供了一种沉默人LINC01614表达的shRNA分子在制备用于抑制细胞LINC01614表达药物中的应用。