[发明专利]UGT85A1或RrUGT3在催化多种底物生成糖苷化合物中的应用

权利要求书

1.糖基转移酶UGT85A1或RrUGT3在催化多种底物生成糖苷化合物中的应用。

2.根据权利要求1所述的糖基转移酶UGT85A1或RrUGT3在催化多种底物生成糖苷化合物中的应用，其特征在于，所述UGT85A1催化的底物为4-羟基苯甲醇、3-羟基苯甲醇、4-(1-羟乙基)苯酚、3-(1-羟乙基)苯酚、4-羟基苯甲酸或3-羟基苯甲酸；所述RrUGT3催化的底物为对甲酚、对乙酚、对异丙基酚、对丙基苯酚、3-乙基苯酚、3-甲酚、4-羟基苯乙酮、4-羟基苯丙酮、3-羟基苯乙酮、3-乙烯基苯酚、3-羟基苯甲醛、4-羟基苯甲醇、4-羟基苯甲醛、3-(1-羟乙基)苯酚、4-(1-羟乙基)苯酚、2-(4-羟基苯基)异丙醇、4-羟基苯甲酸、3-羟基苯甲酸或3-羟基苯甲醇。

3.根据权利要求1所述的糖基转移酶UGT85A1或RrUGT3在催化多种底物生成糖苷化合物中的应用，其特征在于，利用糖基转移酶UGT85A1或RrUGT3催化底物生成糖苷化合物的方法如下：

(1)将糖基转移酶UGT85A1和RrUGT3的基因分别整合至pCDFDuet-1质粒，分别转化进大肠杆菌DH5α，获得pCDFDuet-1-UGT85A1质粒和pCDFDuet-1-RrUGT3质粒；再转化至大肠杆菌BL21(DE3)中，分别获得转化有pCDFDuet-1-UGT85A1质粒的BL21(DE3)菌株和转化有pCDFDuet-1-RrUGT3质粒的BL21(DE3)菌株；

(2)分别将转化有pCDFDuet-1-UGT85A1质粒的BL21(DE3)菌株和转化有pCDFDuet-1-RrUGT3质粒的BL21(DE3)菌株接种于含有50μg/ml链霉素的LB液体培养基，37℃，220rpm培养过夜，获得种子液；

(3)分别按照体积比为1：100的接种量将种子液接种至培养基中，37℃，220rpm培养3-4小时；

(4)待OD₆₀₀达0.6-0.8时，加入1mM IPTG进行诱导，同时加入1mM糖基转移酶底物，30℃，220rpm进行发酵；

(5)发酵48h后，将发酵液高速离心后收集上清液；

(6)取上清液，等体积加入甲醇，混匀后高速离心取上清进行HPLC检测以及MS检测以测定产物生成；

(7)以流速为1BV/h将步骤(5)的上清液加入到AB-8大孔吸附树脂柱中；

(8)向大孔吸附树脂柱中以2BV/h的流速加入水，同样的方法冲洗3-5个柱体积；

(9)在大孔吸附树脂柱中加入浓度为30％-40％的乙醇水溶液进行洗脱，并收集乙醇水洗脱液，速率为1BV/h，洗脱3个柱体积；

(10)将洗脱液进行旋蒸，蒸干后用甲醇进行溶解，再经HPLC制备得纯净的糖苷化合物；

(11)利用核磁鉴定产物结构。

4.根据权利要求3所述的糖基转移酶UGT85A1或RrUGT3在催化多种底物生成糖苷化合物中的应用，其特征在于，步骤(3)所述培养基为M9CA培养基或LB培养基。