[发明专利]一种基于FMs和PMA荧光-比色双模生物传感器的构建和应用

权利要求书

1.一种基于FMs和PMA的荧光-比色双模生物传感器的构建和应用。所述的荧光-比色双模生物传感方法包括FMs，PMA和AAP等，其中FMs具有好的光学性能，提供荧光信号，直径为200nm；PMA还原后生成的磷钼蓝具有较宽的吸光范围，并通过内滤作用使FMs发生荧光猝灭，输出了荧光-比色双模信号，实现在缓冲溶液体系中对ALP的高灵敏检测。FMs和PMA荧光-比色双模生物传感器对ALP的比色和荧光检测限分别为0.068U/L和0.11U/L。此外利用智能手机读取比色信号的便捷传感系统实现对生物标志物ALP的即时检测，具有良好的准确性，检测限为0.4U/L，对实现日常生活中ALP的即时检测和实时监测很有意义。

2.根据权利要求1所述FMs和PMA的比色-荧光双模生物传感器，其特征在于：所述FMs和PMA的比色-荧光双模生物传感器制备步骤如下：

(1)用CutSmart缓冲液配制含AAP和ALP溶液2mL，混匀后25℃反应15min。

(2)25℃下，向步骤(1)反应后的溶液中加入PMA和FMs。

(3)步骤(2)反应溶液反应5min，在紫外吸收扫描范围为500-900nm，检测样品紫外吸收强度。

(4)步骤(2)溶液反应180min后，在荧光发射波长λmax＝625nm(激发光波长λex＝365nm)，发射峰范围为600-675nm条件下检测样品荧光强度。

3.根据权利要求2所述FMs和PMA的比色-荧光双模生物传感器，其特征在于：所述步骤(1)中CutSmart缓冲液为50mM CH₃COOK+30mM Tris-CH₃COOH+10mM CH₃COOMg+100μg/mL牛血清白蛋白(pH＝7.9)；AAP溶液浓度为5mM；ALP的反应浓度溶液为0-150U/L。

4.根据权利要求2所述FMs和PMA的比色-荧光双模生物传感方法，其特征在于：所述步骤(2)中PMA的浓度为2mM，FMs的浓度为5μg/mL。

5.根据权利要求1所述一纸基-智能手机比色生物传感方法，其特征在于：所述的纸基-智能手机比色生物传感系统制备如下：

(1)圆形吸收垫放入超纯水配制的PMA溶液浸泡5s，拿出后室温放置待其自然晾干，获得便携式纸基。

(2)用CutSmart缓冲液配制含AAP和ALP的溶液2mL，混匀后反应15min，反应后的溶液滴加到步骤(1)制备的纸基上。

(3)20min后将经步骤(2)处理的纸基放置于室内白色日光灯下，将智能手机放置于纸基正上方进行拍照，再用可读取RGB数值的智能手机APP对照片进行数值读出。

6.根据权利要求2所述纸基-智能手机比色生物传感方法，其特征在于：所述步骤(1)中PMA溶液浓度为2mM；FMs的浓度为5μg/mL。

7.根据权利要求2所述纸基-智能手机比色生物传感方法，其特征在于：所述步骤(2)中AAP溶液浓度为5mM；ALP的反应浓度溶液为0-80U/L；圆形吸收垫直径为2cm；10μL溶液滴加到晾干纸基上。

8.权利要求1-7任一项所述的基于荧光微球(FMs)和磷钼杂多酸(PMA)测定碱性磷酸酶(ALP)比色-荧光双模生物传感方法，并提出一种纸基-智能手机比色生物传感方法实现对ALP的快速定量检测，其特征在于：PMA在室温下即可快速被ALP与AAP反应生成的AA还原生成磷钼蓝，磷钼蓝在λ＝500-900nm内有紫外吸收，能够吸收FMs位于λ＝620nm处的荧光发射，从而通过内滤效应猝灭FMs的荧光，实现了对ALP的灵敏检测。