[发明专利]一种DNA病毒疫苗的制备方法有效
申请号: | 202111504768.9 | 申请日: | 2021-12-10 |
公开(公告)号: | CN114181287B | 公开(公告)日: | 2023-09-19 |
发明(设计)人: | 王彦辉;张先锋;李自波;周欣;李厚伟;李国辉;焦金英;姬星宇 | 申请(专利权)人: | 商丘美兰生物工程有限公司 |
主分类号: | C07K14/01 | 分类号: | C07K14/01;C12N15/70;C12M1/38;C12M1/36;C12M1/34;C12M1/02;C12M1/12;C12M1/21 |
代理公司: | 郑州万创知识产权代理有限公司 41135 | 代理人: | 任彬 |
地址: | 476000 河南省商*** | 国省代码: | 河南;41 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 dna 病毒 疫苗 制备 方法 | ||
1.一种DNA病毒疫苗的制备方法,其特征在于,所述制备方法包括如下步骤:
(1)对DNA病毒的遗传物质进行测序,确定所述DNA病毒自身特有的蛋白质对应的特有DNA序列;
(2)选取工程细菌,从DNA病毒的遗传物质中截取特有DNA序列,采用基因工程技术将其导入工程细菌内;
(3)采用特有发酵设备对导入病毒特有DNA序列的工程细菌进行发酵培育,使工程细菌的数量增长;
(4)对完成发酵培育的工程细菌进行破碎,从破碎后的工程细菌内提取DNA病毒特有的蛋白质;
(5)根据提取出的DNA病毒特有的蛋白质,制备相应的DNA病毒疫苗;
步骤(3)中,所述特有发酵设备包括支架、罐体、培养液加入装置、缓冲罐、废液收集罐、第一温度控制模块、第二温度控制模块、pH值控制模块、压力控制模块和含氧量控制模块;所述特有发酵设备内培养液的主要成分包括:以1000ml水为基准,分别加入1.5g~2.5g牛肉膏、7g~8.5g蛋白胨、4g~6g氯化钠、10mg~20mg维生素、10g~15g葡萄糖、0.5g~1.5g腺苷三磷酸、0.5g~1g前体氨基酸、20g~30g甘油、15g~25g可溶性淀粉、2mg~3.5mg磷酸氢二钾、2mg~4mg硫酸镁、0.1g~0.2g硝酸铵和1mg~2mg硫酸铜;
所述罐体设置在所述支架上;所述罐体内设置有生物滤膜,所述生物滤膜用于将所述罐体分隔成上腔室和下腔室;所述生物滤膜用于将培养液滤出;所述罐体的一侧设置有排菌管,所述排菌管的一端与所述上腔室连通;在所述罐体内设置有第二搅拌机构,所述第二搅拌机构包括第二电机、第二搅拌轴、搅拌横杆和搅拌纵杆,所述第二搅拌轴转动装配在所述罐体内,所述搅拌轴的上端与所述第二电机连接,所述搅拌横杆的一端固定在所述搅拌轴的圆周侧面上、另一端固定在所述搅拌纵杆上;所述第一温度控制模块、含氧量控制模块和压力控制模块分别设置在罐体上,所述第一温度控制模块用于调节和控制所述罐体内的温度,所述含氧量控制模块用于调节所述罐体内的培养液内的含氧量,所述压力控制模块用于调节所述罐体内的气体压力;所述含氧量控制模块包括含氧量检测传感器、氧气存储罐、流量控制阀、支撑架、环板、输氧管、输氧通道和弥散孔;所述支撑架的一端固定在所述罐体的内侧面上,所述支撑架的另一端固定在所述环板的外侧面上;在所述环板的内侧面上开设有环形凹槽,所述环板套设在所述第二搅拌轴上,与所述第二搅拌轴围合形成环形腔室,在所述环形腔室的两侧设置有密封圈,所述第二搅拌轴可相对所述环板自由转动;所述输氧管的一端与所述氧气存储罐连通,另一端固定在所述环板上,所述环形腔室连通;所述流量控制阀设置在所述输氧管上;所述输氧通道开设在所述第二搅拌轴和搅拌横杆内,所述弥散孔开设在所述搅拌横杆的上端面上,所述弥散孔与所述输氧通道连通;在所述第二搅拌轴的圆周侧面上开设有贯穿孔,所述贯穿孔用于连通环形腔室和输氧通道;所述含氧量检测传感器设置在所述罐体的内表面上,所述含氧量检测传感器和流量控制阀分别与第三处理器电信号连接;所述压力控制模块包括排气管和单向压力阀,所述排气管的下端固定在所述罐体的上端部,所述单向压力阀设置在排气管上;
所述培养液加入装置包括培养液加入罐体、第一搅拌机构和灭菌机构;在所述培养液加入罐体的上端设置有进料管,在缓冲罐与培养液加入罐体之间的管道上分别设置有第二控制阀和单向阀;所述第二控制阀位于所述单向阀靠近所述培养液加入罐体的一侧,所述单向阀从所述培养液加入罐体流向缓冲罐单向导通;所述第一搅拌机构包括第一电机、第一转动轴和第一搅拌叶片,用于对所述培养液加入罐体的物料搅拌均匀;所述灭菌机构包括第一压力传感器、加热丝、第一温度传感器和第一处理器,所述第一压力传感器和第一温度传感器分别设置在所述培养液加入罐体内,所述加热丝螺旋镶嵌在所述培养液加入罐体内,所述第一压力传感器、第一温度传感器和加热丝分别与所述第一处理器电信号连接;
所述缓冲罐通过管道分别与所述培养液加入装置和所述罐体的上腔室连接,所述第二温度控制模块和所述pH值控制模块分别设置在缓冲罐上;所述第二温度控制模块用于检测所述缓冲罐内的温度,所述pH值控制模块用于调整所述缓冲罐内培养液的pH值;所述缓冲罐包括缓冲罐体、第一活塞和第一气缸;所述第一活塞设置在所述缓冲罐体内,所述第一活塞相对所述缓冲罐体内侧壁密封滑动连接;所述第一活塞与缓冲罐体围合形成腔室,所述第二温度控制模块用于检测所述腔室内的培养液温度,所述pH值控制模块用于调节所述腔室内培养液pH值;所述pH值控制模块包括pH传感器、盐酸存储罐和氢氧化钠储存罐,分别在所述盐酸存储罐和氢氧化钠储存罐内分别设置有第二活塞和第二气缸,所述第二活塞分别与盐酸存储罐或氢氧化钠储存罐围合形成存储室,所述pH传感器镶嵌在缓冲罐体的内侧壁上;所述pH传感器、第二气缸分别与第二处理器之间电信号连接;
所述废液收集罐通过管道与所述罐体的下腔室连通,在所述废液收集罐与所述罐体之间的管道上设置有第一控制阀。
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