[发明专利]一种血清白蛋白脱脂方法

说明书

本发明提供一种简易快速的血清白蛋白脱脂方法，在Cohn氏组分Ⅳ上清液、白蛋白沉淀物或白蛋白溶解液中添加乙醇和碳酰胺，配成乙醇体积浓度30—50%，碳酰胺1.0—3.0mol/L的溶液，用醋酸调节溶液pH=4.8±0.2，降温至‑10—‑8℃使白蛋白沉淀，过滤得沉淀物，用乙醇体积浓度30—50%，氯化钠100—150mmol/L，异丙醇0.5—1mol/L，用醋酸调节pH至4.8±0.2的洗涤液进行洗涤脱脂，经溶解复性，超滤透析，获得脱脂血清白蛋白，脂肪酸含量降低至0.005mol/mol血清白蛋白。

技术领域

本发明涉及血清白蛋白纯化方法，尤其是血清白蛋白脱脂方法。

背景技术

血清白蛋白是由人体的肝脏合成，是血浆中含量最高的蛋白质，约占血浆蛋白总含量的50～60％，具有维持血浆胶体渗透压、运输、结合和转运多种载体、抗氧化、调节凝血功能及维持毛细血管通透性等生理功能。

在血液和组织液中，由于血清白蛋白分子的独特结构，使其能结合许多物质，包括脂肪酸、氨基酸、Ga²⁺、Mg²⁺、类固醇及其衍生物等内源性物质，以及抗生素、抗凝血药、心脏药物等多种药物。但血清蛋白分子的结合位点、结合能力是有限的，因此与同一位点结合的配体分子有可能相互竞争也有可能相互替代。

人血清白蛋白中，中、长链不饱和脂肪酸结合在人血清白蛋白的至少7个位点上（Curry S, Brick P, Franks N P. Fatty acid binding to human serum albumin: newinsights from crystallographic studies[J]. Biochimica et Biophysica Acta(BBA)-Molecular and Cell Biology of Lipids, 1999, 1441(2-3): 131-140.Petitpas I, Bhattacharya A A, Twine S, et al. Crystal structure analysis ofwarfarin binding to human serum albumin: anatomy of drug site I[J]. Journalof Biological Chemistry, 2001, 276(25): 22804-22809.），脂肪酸与人血清白蛋白的结合在一定程度上影响了药物分子等配体分子与白蛋白的结合。与不含脂肪酸的白蛋白相比，胆红素、地西泮等配体分子与含脂肪酸的白蛋白结合常数减少约5-14倍（Varshney A,Ahmad B, Khan R H. Comparative studies of unfolding and binding of ligands tohuman serum albumin in the presence of fatty acid: spectroscopic approach[J].International journal of biological macromolecules, 2008, 42(5): 483-490.）。因此，脱去原本与白蛋白结合的脂肪酸分子，能够为药物分子提供结合位点，具有更高的药物结合率，对于药物在体内发挥作用具有重要的意义。

脱脂血清白蛋白是指利用一定的处理手段将原本与白蛋白结合的脂肪酸分子分离出来，提高白蛋白与其他配体分子的结合能力，更好地发挥治疗作用。