[发明专利]一种新型冠状病毒中和抗体快速定量检测方法及应用

说明书

本发明公开了一种新型冠状病毒中和抗体快速定量检测方法，利用胶体金免疫层析分析仪、胶体金免疫层析试纸条，采用国际标准品建立的标准曲线法对全血、血清、血浆等样品中新冠中和抗体进行定量检测。本发明以创新性的检测方法改进实现了胶体金试纸条的定量检测，该方法操作简便、快速、灵敏度高且重复性好，具有突出的技术优势。

技术领域

本发明属于生物技术检测领域，具体涉及一种新型冠状病毒中和抗体快速定量检测方法及应用。

背景技术

冠状病毒在系统分类上属冠状病毒科(Coronaviridae)冠状病毒属(Coronavirus)。冠状病毒属的病毒是具外套膜(envelope)的正链单股RNA病毒，直径约80～120nm，其遗传物质是所有RNA病毒中最大的，感染宿主包括人、鼠、蝙蝠、猪、猫、穿山甲、犬、狼、鸡、牛、蛇类、禽类等脊椎动物。2019新型冠状病毒(SARS-CoV-19,曾用名2019-nCoV)是目前已知的第7种可以感染人的冠状病毒，其余6种分别是HCoV-229E、HCoV-OC43、HCoV-NL63、HCoV-HKU1、SARS-CoV和MERS-CoV。研究表明，其中SARS-CoV-19、SARS-CoV和HCoV-NL63是通过病毒包膜spike glycoprotein(S-protein)介导病毒与宿主细胞膜上的ACE2受体相互作用来感染人的。现有的冠状病毒核酸检测方法包括全基因组测序、RT-PCR法、CRISPR、逆转录环介导等温扩增法(RT-LAMP)和实时RT-LAMP等。

防治新冠肺炎最直接和有效的方法是接种疫苗，通过接种新型冠状病毒疫苗，诱发机体产生抗新型冠状病毒的抗体，从而保护机体免受新型冠状病毒侵染。但是，无论是感染病毒后产生的自然免疫，还是接种疫苗后的人工免疫，并非病毒或疫苗诱生的所有抗体都能起到保护作用，只有那些能够阻断病毒和人体细胞结合的抗体才能起到较好的保护作用，这种抗体通常被称为中和抗体。世界卫生组织(WHO)通过国际实验室间的协作标定，发布了新冠抗体的第一代国际标准品(NIBSC code:20/136)，确定了中和抗体的国际单位浓度，为后续定量研究奠定了基础。

目前，对疫情中或疫情后流行病血清学调查主要是检测血清总抗体；但如果能同时检测出中和抗体的含量则对预后及再次感染的风险评估具有重要意义。同样，对于接种疫苗后如果能在检测总抗体的同时检测中和抗体的含量，则对评估疫苗的效果及是否需要和何时再次免疫具有重要意义。然而有些免疫功能较弱的病人可能抗体量很低，容易造成假阴性。在新冠病毒感染之初，如果病原体抗原含量也较低，同样会因不容易检测而导致假阳性或者漏检。《新型冠状病毒预防用疫苗临床评价指导原则》中指出为确保上市广泛应用的新冠疫苗能产生预期的效果，有效性评价的主要终点应为预防COVID-19发病，目标人群的保护效力最好能达到70％以上。疫苗上市后，应继续观察在大范围接种情况下的安全性和临床保护效果，并对保护持久性继续进行研究。传统评价疫苗的方法是通过中和实验，采用活病毒来验证中和抗体的效能。操作复杂，耗时长，风险高，给大规模开展人群接种疫苗效果评价带来很大不便。因此，急需建立一种易操作、快速、便捷、定量准确的中和抗体检测方法。

发明内容

本发明的目的是建立一种新型冠状病毒中和抗体快速定量检测方法，利用胶体金免疫层析分析仪、中和抗体胶体金免疫层析试纸条，采用国际标准品建立的标准曲线法对全血、血清、血浆等样品中新冠中和抗体进行定量检测。本发明以创新性的检测方法改进实现了胶体金试纸条的定量检测，该方法操作简便、快速、灵敏度高且重复性好，具有突出的技术优势。

附图说明

图1是四参数拟合中和抗体定量标准曲线。

具体实施方式

本发明所述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。本发明提供的检测方法具体步骤如下：

1)标准曲线的建立