[发明专利]一种纤维素酶超声波协同提取梯棱羊肚菌黑色素的方法

说明书

本发明公开了一种纤维素酶超声波协同提取梯棱羊肚菌黑色素的方法。本发明方法，包括如下步骤：(1)将梯棱羊肚菌子实体粉碎后溶于水中，加入纤维素酶进行酶解；(2)对酶解后的体系进行超声处理；(3)在超声处理后的体系中加入碱进行碱提，碱提结束后离心，收集上清液，得到黑色素提取液；加入酸进行酸沉，将收集的沉淀清洗后干燥，得到黑色素粗品；(4)将黑色素粗品溶于水中，加入蛋白酶进行水解以去除蛋白质，然后去除油脂；加入酸进行酸沉，将收集的沉淀清洗后干燥，得到梯棱羊肚菌黑色素。本发明通过单因素试验、PB试验和响应面法得出了梯棱羊肚菌黑色素的最佳提取工艺，并以黑色素得率和蛋白质含量为指标，筛选出最优除蛋白方法。

技术领域

本发明涉及一种黑色素的提取方法，尤其涉及一种纤维素酶超声波协同提取梯棱羊肚菌黑色素的方法，属于食用菌深加工技术领域。

背景技术

羊肚菌俗称羊雀菌、蜂窝磨或羊肚，隶属子囊菌亚门(Ascomycotina)、盘菌纲(Discomycetes)、盘菌目(Pezizales)、羊肚菌科(Morchellacea)、羊肚菌属(Morchella)。羊肚菌按照子实体颜色大致分为3个支系，分别为变红羊肚菌、黄羊肚菌、黑羊肚菌。梯棱羊肚菌(Morchella importuna)属于黑羊肚菌支系中的一种。梯棱羊肚菌(M.importuna)富含多种人体所需要的氨基酸、多糖、黑色素、皂苷类、酮、醛、酯等活性物质，其营养价值丰富，有明显的抗癌、补脑、增强人体免疫力的作用，且是我国人工栽培的主要品系。

黑色素是一种常见的生物色素，是吲哚类和酚类聚合而成的生物大分子，易与蛋白质、油脂和多糖类结合，不溶于水、酸性溶液及大多数有机溶剂。天然黑色素来源广泛，动物、植物以及微生物中均有黑色素的相关研究报道。黑色素具有抗肿瘤、抗辐射、提高免疫力等生理活性，因此黑色素在医药、化妆品、生物材料等方面的应用价值不言而喻。

目前大部分羊肚菌的加工方式以干制等初加工方式为主。对羊肚菌的深加工多集中在多糖，对其黑色素相关研究还非常少。羊肚菌在干制过程中会产生一些残次品和破损的下脚料，对其充分加工利用可进一步提高羊肚菌的附加值。由于黑色素具有易溶于碱，在酸性条件下会形成沉淀的特性，碱溶酸沉法是黑色素提取常用的方法。但在试验过程中，使用传统的碱溶酸沉法所需时间长，效率低。此外，由于黑色素易与蛋白质、油脂和多糖类结合，以及其异质性和不均一性，导致黑色素在纯化时难度较大。黑色素的提取方法根据黑色素的种类、来源、产生部位、含量多少以及其杂质含量而定。如何对梯棱羊肚菌中的黑色素进行提取纯化，以实现羊肚菌黑色的提取开发，是当前需要解决的技术问题。

发明内容

本发明的目的是提供一种纤维素酶超声波协同提取梯棱羊肚菌黑色素的方法。

本发明提供的一种梯棱羊肚菌黑色素的提取方法，包括如下步骤：

(1)将梯棱羊肚菌子实体粉碎后溶于水中，加入纤维素酶进行酶解；

(2)对步骤(1)酶解后的体系进行超声处理；

(3)在步骤(2)超声处理后的体系中加入碱进行碱提，碱提结束后离心，收集上清液，得到黑色素提取液；在所述黑色素提取液中加入酸进行酸沉，将收集的沉淀清洗后干燥，得到梯棱羊肚菌黑色素粗品；

(4)将步骤(3)得到的梯棱羊肚菌黑色素粗品溶于水中，加入蛋白酶进行酶解以去除蛋白质，调节体系pH至碱性，然后去除油脂；在去除蛋白和油脂的体系中加入酸进行酸沉，将收集的沉淀清洗后干燥，得到所述梯棱羊肚菌黑色素。

本发明中，通过单因素试验、PB试验和响应面法从而得出梯棱羊肚菌黑色素的最佳提取工艺如下：

步骤(1)中，所述纤维素酶与所述梯棱羊肚菌子实体的质量比为20mg：1g；所述纤维素酶酶解的温度为40℃；所述纤维素酶酶解的时间为78.6min；

步骤(2)中，所述超声的功率为200W，时间为80min；