[发明专利]琼脂糖微球的清洗方法

说明书

本发明提供了一种琼脂糖微球的清洗方法，将乳化‑冷却法得到的琼脂糖微球乳液静置分层，将上层油相分离出来，得到下层琼脂糖微球乳化层；然后向琼脂糖微球乳化层中加入水，静置分层，分离得到上层乳化层和下层琼脂糖微球水相层，从下层水相层中分离得到琼脂糖微球；将上层乳化层反复加水分层分离，将每一次分离得到的琼脂糖微球混合，水洗得到高纯度琼脂糖微球。本发明首先将乳化液静置，使大部分油相分离出，大大减少了待清洗乳化层的体积，故而能提高单次可实现的最大清洗量，节省设备的运行成本；同时乳化层体积的减少也必将减少清洗液的用量，进一步减少清洗成本，适合工业化生产；所得微球在交联反应完成后具备良好的理化性质。

技术领域

本发明涉及固液分离技术领域，尤其涉及一种琼脂糖微球的清洗方法。

背景技术

琼脂糖微球具备极高的附加价值，主要用于分离纯化病毒、蛋白质、酶等大分子生物活性物质，在生物医药、血液制品及疫苗等行业得到广泛应用。琼脂糖微球作为一种天然多糖型生物填料，具备生物相容性良好、多孔、亲水及不含带电基团等优点，被广泛应用于分离层析领域。同时琼脂糖微球表面含有大量羟基，易与很多基团发生化学反应，因此较容易对其表面进行修饰，键合不同功能的基团，使其适用于不同的分离对象及分离要求。

目前，琼脂糖微球的主要制备方法有乳化-冷却法、喷射法、微流控液滴生成法及无机分散剂乳化法。其中，乳化-冷却法是最早用于琼脂糖微球的制备方法，主要利用琼脂糖加热溶解后，遇冷固化的特点来制备琼脂糖微球。此法工艺流程简单，生产效率高，至今仍是最主要的琼脂糖微球制备方法。

现有技术是通过反相乳液聚合法制备琼脂糖微球，主要步骤是将琼脂糖在水中加热溶解作为水相，乳化剂加入有机溶剂中加热搅拌作为油相，将水相滴入油相中乳化成液滴微球，然后降温固化即得琼脂糖微球。但此种方法得到的微球存在于油包水乳化液中，需要将其分离清洗收集纯净的琼脂糖微球。由于为油包水乳化液，如果直接采用抽滤，虽然能够减少后续洗涤液的用量，但容易堵塞滤纸，而且会破坏微球结构，因此不便使用。如果采用离心分离再清洗，如附图1所示，离心后分层三层，微球上层为含油乳化液，分离出的微球表面仍吸附有较多油相，需要有机试剂清洗去除，而且离心力也容易破坏微球结构，导致聚集，不便于直接使用。因此，目前主流的分离清洗方法是直接以水和/或乙醇交替清洗乳化液，以使水相微球逐渐从油相中分离出来，并清洗净表面的油相。专利CN 102233254 A中表明琼脂糖喷雾冷却固化成球后，依次使用石油醚、丙酮、乙醇和水进行洗涤。专利CN109225177 A表明所得微球用石油醚和异丙醇的混合洗涤剂洗涤后，再分别用石油醚和水清洗。上述微球的清洗方法在实际生产中会使用大量的有机试剂，使用过程中的回收成本高，且生产过程中易造成环境污染。

有鉴于此，有必要设计一种改进的琼脂糖微球的清洗方法，以解决上述问题。

发明内容

为了克服上述现有技术的不足，本发明的目的在于提供一种琼脂糖微球的清洗方法。首先将乳化液静置，使大部分油相分离出，大大减少了待清洗乳化层的体积，故而能提高单次可实现的最大清洗量，节省设备的运行成本；同时乳化层体积的减少也必将减少清洗液的用量，进一步减少清洗成本。

为实现上述发明目的，本发明提供了一种琼脂糖微球的清洗方法，包括以下步骤：

S1.将琼脂糖热的水溶液分散于热的油相中，混合均匀后按预设降温速率降温固化，得到琼脂糖微球乳液；

S2.将步骤S1得到的所述琼脂糖微球乳液静置分层，将上层油相分离出来，得到下层琼脂糖微球乳化层；

S3.向步骤S2得到的所述琼脂糖微球乳化层中加入水，搅拌预设时间，然后静置分层，分离得到上层乳化层和下层琼脂糖微球水相层，从所述下层琼脂糖微球水相层中分离得到琼脂糖微球；

S4.将步骤S3得到的所述乳化层进行多次步骤S3的分离操作，将每一次分离得到的所述琼脂糖微球混合，水洗得到高纯度琼脂糖微球。