[发明专利]一种检测与吉兰巴雷综合征相关12种病原体基因芯片及其应用

说明书

一种检测与吉兰巴雷综合征相关12种病原体基因芯片，该基因芯片制备包括：制备蝶式微流控基因芯片；提取待测样品DNA与cDNA；恒温扩增体系配制；碟式微流控基因芯片加样；恒温扩增检测；结果判读；使用前述方法，选取12例临床诊断为吉兰巴雷综合征患者脑脊液中病原体总DNA与cDNA，4℃保存备用。本发明首次设计针对吉兰巴雷综合征12种相关病原体的碟式微流控基因检测芯片，针对甲肝病毒、单纯疱疹病毒、西尼罗病毒、寨卡病毒亚洲型、寨卡病毒非洲型、巨细胞病毒、乙脑病毒、空肠弯曲菌、EB病毒、黄热病毒、丙肝病毒，戊肝病毒等12种病原体所有靶基因进行高通量并行检测，是国内目前吉兰巴雷综合征相关病原体检测通量最高的基因芯片。

技术领域

本发明属于生物医药学技术领域，尤其是涉及一种检测与吉兰巴雷综合征相关12种病原体基因芯片及其应用。

背景技术

吉兰巴雷综合征(Guillain–Barrésyndrome,GBS)系一类免疫介导的急性炎性周围神经病，是引起急性对称性迟缓性麻痹最常见的原因。GBS以周围神经和神经根的脱髓鞘病变以及小血管炎性细胞浸润为病理特点，目前认为针对雪旺细胞、髓鞘或轴索的细胞或者体液免疫参与了发病，感染性及非感染性因素均可诱发该病。GBS大多急性起病，首发症状多为四肢对称性迟缓性瘫痪，腱反射消失或减弱，肢体无力常始于远端，可波及躯干及颅神经(以面神经最常见)，部分可出现自主神经功能障碍甚至累及呼吸肌；症状多在2-4周内达峰，呈单相自限性病程，恢复期可持续数周、数月甚至数年。有关GBS发病原因的研究显示，多种病原体感染，包括甲肝病毒，单纯疱疹病毒，西尼罗病毒，寨卡病毒亚洲型和非洲型，巨细胞病毒，乙脑病毒，空肠弯曲菌，EB病毒，黄热病毒，丙肝病毒，戊肝病毒等，都成为GBS发病的诱因。而目前尚缺乏特异性检测这些病原体感染的诊断试剂。

发明内容

本发明的目的是针对目前尚缺乏特异性检测这些病原体感染的诊断试剂存在的问题提供一种检测与吉兰巴雷综合征相关12种病原体基因芯片及其应用。

本发明的基本构思：微流控芯片技术是一种芯片集成技术，可以在一张高度集成化的芯片上面，完成待测样品的制备、分离、检测等，实现了“样品进、结果出”的即时检测，能够满足生命科学各领域开展大样本的快速检测需求，是未来临床医学检测的一个发展方向。

环介导等温扩增PCR技术(loop-mediated isothermal amplification PCR，LAMP)是2000年开发的一种新颖的恒温核酸扩增方法，其特点是针对靶基因的6个区域设计4种特异引物，利用一种链置换DNA聚合酶在等温条件(63℃左右)保温30－60分钟，即可完成核酸扩增反应。与常规PCR相比，不需要模板的热变性、温度循环、电泳及紫外观察等过程。LAMP是一种全新的核酸扩增方法，具有简单、快速、特异性强的特点。该技术在灵敏度、特异性和检测范围等指标上能媲美甚至优于PCR技术，不依赖任何专门的仪器设备实现现场高通量快速检测，检测成本远低于荧光定量PCR。

因此，基于LAMP恒温扩增PCR技术和蝶式微流控芯片技术设计的12种脑炎病毒基因检测芯片及其应用，将为临床诊断感染性脑炎的致病菌类型，明确临床诊断及指导临床用药等提供依据。

本发明的技术方案为：一种检测与吉兰巴雷综合征相关12种病原体基因芯片，该基因芯片制备包括如下步骤：

(1)制备蝶式微流控基因芯片

①待检病原体的选择

通过临床资料和相关文献，选择甲肝病毒，单纯疱疹病毒，西尼罗病毒，寨卡病毒亚洲型和非洲型，巨细胞病毒，乙脑病毒，空肠弯曲菌，EB病毒，黄热病毒，丙肝病毒，戊肝病毒等12种吉兰巴雷综合征相关病原体为待检病原体；

②待检病原体引物设计