[发明专利]一种四氢嘧啶中羟基四氢嘧啶残留的检测方法

说明书

本发明公开了一种四氢嘧啶中羟基四氢嘧啶残留的检测方法，所述的检测方法包括：对照品溶液的制备：将羟基四氢嘧啶对照品溶解得到羟基四氢嘧啶对照品溶液；供试品溶液的制备：将四氢嘧啶供试品溶解得到供试品溶液；测定：使用高效液相分析方法对供试品溶液中的羟基四氢嘧啶残留进行检测，所述的检测方法操作简单，分离度高、分析时间短，检测限低。并且不使用甲醇、乙腈等有毒有害溶剂。

技术领域

本发明涉及羟基四氢嘧啶检测的技术领域，尤其涉及一种四氢嘧啶中羟基四氢嘧啶残留的检测方法。

背景技术

四氢嘧啶是一种不带电荷的小分子的极性化合物，广泛存在于大多数可在极端环境下生存的中度嗜盐菌细胞内，用来平衡细胞渗透压，羟基四氢嘧啶是其常见的衍生物。

目前，四氢嘧啶的检测方法主要是采用高效液相色谱法，但是四氢嘧啶和羟基四氢嘧啶是一种强烈的亲水性物质，在常规的色谱条件或常规反相色谱柱上的保留很弱，例如，在普通C18柱上保留时间极短，难以有效分离；某些氨基柱虽然能分离这两种化合物，但分离度和柱效不佳。

现有技术中，李海宇、彭彤、白林含的“UPLC-MS法测定中度嗜盐菌中的四氢嘧啶与羟基四氢嘧啶的方法优化”一文采用超高效液相色谱，乙腈/水(V/V,1:99)UPLCHSST3色谱柱，流速0.4mL/min，检测波长204nm等色谱条件分析四氢嘧啶与羟基四氢嘧啶，该方法依赖于UPLC和特定的色谱柱，成本较高，适用性不强，且流动相使用毒性有机试剂。贺冰、陶萍、陈爱连等的“亲水相互作用色谱法测定中度嗜盐菌中四氢嘧啶和羟基四氢嘧啶”一文中采用乙腈和NH₄H₂PO₄缓冲溶液为流动相，在210nm的检测波长下，用ZIC-HILIC柱进行分离，同时测定提取样品中的四氢嘧啶和羟基四氢嘧啶。从其结果可知，该方法需采用专门用于分析极性和亲水性化合物的HILIC柱，并提升流动相中毒性有机试剂的比例到80％时，才能完全分离四氢嘧啶和羟基四氢嘧啶。可见，现有技术中，四氢嘧啶和羟基四氢嘧啶的分析方法并不理想。

发明内容

如上所述，为了解决上述技术问题，本发明提供了一种四氢嘧啶中羟基四氢嘧啶残留的检测方法，所述方法操作简便，分析时间短，检测限低，并且其使用的流动相是水，未使用甲醇、乙腈等有毒有害溶剂。

本发明具体技术方案如下：

1.一种四氢嘧啶中羟基四氢嘧啶残留的检测方法，其包括：

对照品溶液的制备：将羟基四氢嘧啶对照品溶解得到羟基四氢嘧啶对照品溶液；

供试品溶液的制备：将四氢嘧啶供试品溶解得到供试品溶液；

测定：使用高效液相分析方法对供试品溶液中的羟基四氢嘧啶残留进行检测。

2.根据项1所述的检测方法，其中，流动相为水。

3.根据项1或2所述的检测方法，其中，流动相的流速为0.4-1.2mL/min，优选为0.5-0.7mL/min。

4.根据项1-3中任一项所述的检测方法，其中，色谱柱为C18色谱柱，优选为填料为十八烷基键合硅胶的C18柱，进一步优选为ZORBAX SB-Aq柱。

5.根据项4所述的检测方法，其中，所述色谱柱的柱温为30-60℃，优选为35-45℃。

6.根据项1-5中任一项所述的检测方法，其中，检测波长为190-220nm，优选为210nm。

7.根据项1-6中任一项所述的检测方法，其中，进样量为5-100μL，优选为10-30μL。

8.根据项1-7中任一项所述的检测方法，其中，采用外标法测定四氢嘧啶供试品中的羟基四氢嘧啶的含量。

9.根据项1-8中任一项所述的检测方法，其中，羟基四氢嘧啶的检测限≤1μg/g。