[发明专利]重组载体及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种重组载体的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：

构建带有化学遗传学激活元件的sgRNA骨架质粒；及

向所述带有化学遗传学激活元件的sgRNA骨架质粒中插入sgRNA片段，所述sgRNA片段用于敲除neurotensin蛋白，得到所述重组载体。

2.根据权利要求1所述的重组载体的构建方法，其特征在于，构建所述带有化学遗传学激活元件的sgRNA骨架质粒的步骤包括：

采用质粒重组技术将原始sgRNA骨架质粒与化学遗传学质粒进行质粒重组，所述化学遗传学质粒带有所述化学遗传学激活元件。

3.根据权利要求2所述的重组载体的构建方法，其特征在于，构建所述带有化学遗传学激活元件的sgRNA骨架质粒的步骤包括：

将所述原始sgRNA骨架质粒进行酶切，得到含有sgRNA骨架的片段；

将所述化学遗传学质粒进行酶切，得到含有所述化学遗传学激活元件的片段；及

将所述含有sgRNA骨架的片段和所述含有所述化学遗传学激活元件的片段连接，得到所述带有化学遗传学激活元件的sgRNA骨架质粒。

4.根据权利要求2所述的重组载体的构建方法，其特征在于，所述原始sgRNA骨架质粒包括AAV-U6-sgRNA(backbone)-pCBh-DIO-ChR2-mCherry质粒；所述化学遗传学质粒包括pAAV-hSyn-DIO-hM3D(Gq)-mCherry质粒；

所述将原始sgRNA骨架质粒与化学遗传学质粒进行质粒重组的步骤包括：

将AAV-U6-sgRNA(backbone)-pCBh-DIO-ChR2-mCherry质粒进行酶切，得到包含AAV-U6-sgRNA(backbone)的片段；

将pAAV-hSyn-DIO-hM3D(Gq)-mCherry质粒进行酶切，得到包含DIO-hM3D(Gq)-mCherry的片段；及

将包含AAV-U6-sgRNA(backbone)的片段和包含DIO-hM3D(Gq)-mCherry的片段连接。

5.根据权利要求1所述的重组载体的构建方法，其特征在于，所述向所述带有化学遗传学激活元件的sgRNA骨架质粒中插入sgRNA片段的步骤包括：采用质粒重组技术向所述带有化学遗传学激活元件的sgRNA骨架质粒中插入所述sgRNA片段。

6.根据权利要求1所述的重组载体的构建方法，其特征在于，所述重组载体为病毒载体，所述向所述带有化学遗传学激活元件的sgRNA骨架质粒中插入sgRNA片段的步骤之后，还包括如下步骤：将插入有所述sgRNA片段的重组质粒包装成病毒。

7.根据权利要求1～6任一项所述的重组载体的构建方法，其特征在于，所述sgRNA片段的序列如SEQ ID No.1所示。

8.一种重组载体，其特征在于，由权利要求1-7任一项所述的重组载体的构建方法构建得到。

9.一种重组载体，其特征在于，包括：带有化学遗传学激活元件的sgRNA骨架质粒，所述带有化学遗传学激活元件的sgRNA骨架质粒中还插入sgRNA片段，所述sgRNA片段用于敲除neurotensin蛋白。

10.根据权利要求9所述的重组载体，其特征在于，所述化学遗传学激活元件为化学遗传学兴奋性受体；

及/或，所述sgRNA片段的序列如SEQ ID No.1所示；

及/或，所述重组载体为病毒载体。