[发明专利]检测牡荆素的方法

说明书

本发明属于医药检测技术领域，具体涉及检测牡荆素的方法。针对现有技术中检测绿豆大曲中牡荆素时间长，灵敏度低且不能定量分析的问题，本发明提供了检测牡荆素的方法。本发明通过合成对牡荆素有荧光敏感性的非共轭聚合物点(NCPDs)，基于该荧光材料建立一种适用于绿豆大曲中牡荆素快速测定的荧光定量检测方法。检测过程不使用有毒有害试剂，安全性高，适用于生产现场快速检测场景的应用。

技术领域

本发明属于医药检测技术领域，具体涉及检测牡荆素的方法。

背景技术

绿豆大曲是以绿豆为主的复方提取液制成的养生酒，具有潜在的保肝功效。绿豆保肝作用的主要生理活性成分是黄酮类成分，牡荆素是绿豆黄酮的主要成分，占比达到98％，文献报道牡荆素在绿豆粉末中检测含量为1.04～1.71mg/g。

目前，已经针对绿豆大曲建立了对功效成分添加进行质量控制的指标限值，确定了牡荆素为功效成分质量标志物。常规的高效液相色谱-紫外检测器方法需要经过色谱分离，完成整套分析流程一般需要1小时以上，不适合用于检测样品数量少但对检测效率有较高要求的生产过程的质量控制场景。

因此建立一种适用于生产过程的质量控制，简便快速，灵敏度和线性范围均符合绿豆大曲中牡荆素的定量测定的方法是需要解决的技术问题。

发明内容

针对现有技术中检测绿豆大曲中牡荆素时间长，灵敏度低且不能定量分析的问题，本发明提供了检测牡荆素的方法，该方法包括以下步骤：

(1)合成NCPDs：以超支化聚乙烯亚胺和L-苏氨酸为原料，通过水热法制备NCPDs，NCPDs为非共轭聚合物点；

(2)标准曲线绘制：配置不同浓度的牡荆素标准溶液，测定各浓度溶液的荧光强度，以牡荆素浓度为横坐标，F₀/F为纵坐标绘制标准曲线；其中F₀表示不加牡荆素标准溶液的NCPDs荧光强度，F表示加入一定浓度的牡荆素标准溶液后的NCPDs荧光强度；

(3)荧光测定：测定未添加样品溶液的NCPDs溶液荧光强度F₀和加入样品溶液的NCPDs溶液荧光强度F，将F₀/F代入标准曲线中定量分析。

其中，步骤(1)中，所述超支化聚乙烯亚胺分子量为Mw＝22000～28000Da。

其中，步骤(1)中，所述NCPDs是将超支化聚乙烯亚胺溶于PBS溶液中，搅拌均匀后，加入L-苏氨酸后进行水热反应，反应后冷却，然后透析纯化、冷冻干燥后，即得。

其中，步骤(1)中，所述超支化聚乙烯亚胺和L-苏氨酸的质量比为1：5～8。

优选地，所述超支化聚乙烯亚胺和L-苏氨酸的质量比为1：6。

其中，步骤(1)中，所述水热反应中，反应温度为120～180℃，反应时间为5～8h。

优选地，所述水热反应中，反应温度为150℃，反应时间为6h。

其中，步骤(1)中，所述水热反应环境为密闭高压条件，压力为0.01～0.05MPa。

其中，步骤(1)中，所述透析的分子量截止为3500Da，纯化时间为1～2天。

其中，步骤(2)中，所述牡荆素标准溶液浓度为0～40μg/mL。

其中，步骤(3)中，所述NCPDs加入量为1.80～1.99mL，样品溶液加入量为10～200μL。

优选地，所述NCPDs加入量为1.99mL，样品溶液加入量为10μL。

上述检测牡荆素的方法适用于绿豆大曲中牡荆素的定量测定。