[发明专利]一株水稻内生灰褐色链霉菌Ahn75及其应用

说明书

本发明公开了一株水稻内生灰褐色链霉菌Ahn75及其应用。该菌株分类命名为：灰褐色链霉菌(Streptomyces griseobrunneus)，保藏编号为：CCTCC NO:M 2019890。本发明的灰褐色链霉菌Ahn75在体外能高效抑制12个不同生理小种稻瘟病病原菌的生长。该菌株的发酵滤液能同时抑制稻瘟病菌的菌丝生长和孢子萌发，且含有较多种类的活性化合物，大小分布在3kD以下和10kD‑30kD，30kD以上，小分子活性化合物包含有缬氨霉素。同时，该菌株具有产铁载体、解钾、固氮等促生长性能。这些结果表明该菌具有开发广谱且绿色环保的新型水稻药肥的潜力。

技术领域

本发明属于微生物领域，涉及到一株水稻内生灰褐色链霉菌及其在抗稻瘟病和促进水稻生长等方面的应用。

背景技术

水稻稻瘟病由真菌稻梨孢菌(Magnaporthe oryzae)侵染引起，是全世界稻区危害最严重的水稻病害之一。稻瘟病从侵染、形成病斑到扩散新的孢子仅需20天左右，能够侵染水稻大多数组织，在全球水稻种植区均有发生。每年因稻瘟病导致的水稻产量损失，约占总产量的10％-30％，可以养活近六千万的人口。目前，培育抗病新品种和喷施化学农药是防治稻瘟病的主要手段，但是抗病新品种的选育不仅周期长，而且存在抗性易丢失的问题，而大量使用化学农药不但会污染环境，还会导致有害物质残留在稻米中，影响人类健康。因此，探索开发新的方法来控制稻瘟病越来越受到人们重视，其中，生物防治成为重要的研究领域。

内生菌是可以在植物的整个或部分生长周期中稳定定殖在植物内部的微生物菌群。与根际和土壤微生物相比，内生菌生长在植物内部而不会与土壤菌产生生存竞争。而且，内生菌能在植物体内存活而不对寄主植物产生明显不利影响，在长期的协同进化过程中，与植物形成了互利互惠的关系。近年来的研究显示，水稻植株自身也存在一些能抑制稻瘟病菌的内生菌。作为目前抗生素最大生产类群的组成部分之一，内生链霉菌显然更具有生物防治的潜力。

发明内容

本发明首要目的是提供一种防治水稻稻瘟病的内生链霉菌，该菌株能高效抑制12种不同生理小种的稻瘟病菌，其发酵液中抗菌活性化合物种类多，大小不一。该菌属于植物内生菌，从海南水稻稻瘟病发病区的未发病水稻茎组织中筛选获得。

本发明所得菌株结合菌落菌体形态特征和基于16S rRNA、gyrB、atpD、recA、rpoB和trpB基因序列的系统发育树，鉴定为灰褐色链霉菌(Streptomyces griseobrunneus)Ahn75。该菌株已于2019年11月4日由中国典型培养物保藏中心(保藏地址：武汉大学)所保藏，保藏编号为CCTCC NO:M 2019890。

本发明的第二个目的是提供所述的水稻内生灰褐色链霉菌Ahn75在防治水稻稻瘟病中的应用。

本发明的第三个目的是提供所述的水稻内生灰褐色链霉菌Ahn75发酵液在防治水稻稻瘟病中的应用。

进一步地，所述的发酵液抑制稻瘟病菌的菌丝生长和/或孢子萌发。

本发明所得菌株能高效抑制12种不同生理小种的稻瘟病病原菌，对稻瘟病菌42号的抑菌率最高达61.93％。

进一步研究发现：所述的水稻内生灰褐色链霉菌Ahn75在初始pH7-9的ISP2培养基中生物量和发酵液抑菌活性高于初始pH4-6。最高生物量1190.63mg/50mL，100μL发酵液对稻梨孢菌丝生长最高抑菌率为72.83％。

所述的水稻内生灰褐色链霉菌Ahn75发酵液在50℃以下活性稳定，在80℃以上处理后活性逐渐降低，同时对蛋白酶K稳定。

本发明的第四个目的是提供所述的水稻内生灰褐色链霉菌Ahn75发酵液中的活性物质在防治水稻稻瘟病中的应用。

进一步地，所述的水稻内生灰褐色链霉菌Ahn75发酵液中的活性物质大小分布在3kD以下和10kD-30kD，30kD以上，3kD以下活性物质包含有缬氨霉素。