[发明专利]一种细胞保存液及其应用和细胞保存方法

说明书

本发明属于细胞生物学领域，特别是涉及一种细胞保存液及其应用和细胞保存方法。本发明提供了一种细胞保存液，所述细胞保存液包括磷酸缓冲液、热休克蛋白、谷氨酰胺、依达拉奉和海藻糖。本发明提供的细胞保存液在2℃～8℃的条件下细胞保存的效果最佳，在空间大，氧气充足的条件下维持细胞活率不低于90％高达7d，适合高密度保存，保护细胞机能及性状，能提高细胞的保存效果，极大的延长了细胞制剂的保存时间，在细胞短期保存、短时间运输、外送检测，保证细胞的活性都有很大的应用。

技术领域

本发明属于细胞生物学领域，特别是涉及一种细胞保存液及其应用和细胞保存方法。

背景技术

随着细胞培养技术的发展，应用于临床的细胞药物逐渐增多，现阶段对于所需细胞的质量要求越来越高，活细胞作为细胞治疗产品的主要成分，其活率的高低等其他参数直接影响后续治疗效果。但是在实际应用中，在第三方机构检验细胞质量的途中，运输和保存都会对细胞的状态造成不良影响，进而干扰检测结果，因此如何保证细胞的质量一直是本领域科研人员研究的课题。

发明内容

为了解决上述问题，本发明提供了一种细胞保存液及其应用和细胞保存方法。本发明提供的细胞保存液能够有效延长活细胞制剂的保存时间，并保护细胞机能及性状，提高细胞的保存效果提高活率，使得细胞检测结果更加准确。同时本发明提供的细胞保存液应用方便，具有极高的市场化前景。

为了实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

本发明提供了一种细胞保存液，所述细胞保存液包括以下组分：磷酸缓冲液、热休克蛋白、谷氨酰胺、依达拉奉和海藻糖。

优选的，所述细胞保存液包括质量浓度为0.002％～0.01％的热休克蛋白、体积分数为0.2％～3％的谷氨酰胺、质量浓度为1％～5％的依达拉奉、质量浓度为1％～3％的海藻糖含量为和体积分数为93％～98％的磷酸盐缓冲液；

所述谷氨酰胺的浓度为200mM。

本发明还提供了上述细胞保存液在保存细胞中的应用。

优选的，所述细胞包括干细胞和自然杀伤细胞。

本发明提供了一种细胞保存方法，所述细胞保存方法利用了上述细胞保存液。

优选的，所述细胞保存方法包括以下步骤：

(1)将细胞悬浮于所述细胞保存液中得到细胞悬液；

(2)将细胞悬液于2℃～8℃的环境中保存。

优选的，所述细胞悬液中细胞的密度为1×10⁷cells/mL～1×10⁸cells/mL。

优选的，所述细胞悬液的保存时间为2～7d。

本发明提供了一种细胞保存液，所述细胞保存液包括磷酸缓冲液、热休克蛋白、谷氨酰胺、依达拉奉和海藻糖。本发明提供的细胞保存液中使用的热休克蛋白(HSP)能够通过干扰引起凋亡调节蛋白激活的信号转导通路抑制细胞的凋亡，是细胞凋亡的关键调节蛋白，热休克蛋白能够同时减轻H₂O₂介导的蛋白氧化和脂质过氧化，从而起到细胞保护的作用；谷氨酰胺是HSP良好诱导剂，具有无毒害作用，可以诱导热休克蛋白发挥细胞保护作用；本发明选择海藻糖能够有效避免低温对细胞膜蛋白质和脂质的损伤；利用依达拉奉能够清除体内的活性氧分子，抑制脂质过氧化反应，阻止细胞损害的特性，将之作为稳定剂，提高细胞保存液的稳定性。本发明提供的细胞保存液组成简单，使用便捷，可以有效解决市面上已售细胞保存液越来越专业使用条件这一难题。同时本发明提供的细胞保存方法于低温保存取自人体的细胞(如人类间充质干细胞、人淋巴细胞、外周血PBMCS)或细胞株和细胞系，可以避免外源的潜在污染风险，而低温保存则可延缓细胞代谢速率，更好的保护细胞，提高保存细胞的活率，保持其增殖特性。