[发明专利]一种可溶性B7-H5蛋白含量检测的酶联免疫检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种用于检测分析可溶性B7‑H5蛋白含量的酶联免疫试剂盒，其特征在于该试剂盒包括B7‑H5‑2E5和B7‑H5‑7B10两种抗人B7‑H5单克隆抗体：B7‑H5‑2E5包括重链和轻链，其中重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.1；轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.2；B7‑H5‑7B10同样包括重链和轻链，其重链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.3；B7‑H5‑7B10的轻链可变区的氨基酸序列为SEQ ID NO.4。此外，本发明还公开了该试剂盒的用途。本发明的酶联免疫试剂盒能够有效检测可溶性B7‑H5含量。利用该试剂盒检测发现，健康人血清中含有一定基础水平的可溶性B7‑H5蛋白，结直肠癌、肺癌和胃癌患者血清可溶性B7‑H5含量明显升高，与患者的临床分期和病理有相关性，肿瘤患者体液中可溶性B7‑H5含量检测具有潜在的临床价值。

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，具体涉及一种对可溶性B7-H5蛋白含量进行定量分析的酶联免疫检测试剂盒及其用途。

背景技术

B7-CD28家族成员介导的共刺激信号在T细胞的活化及免疫耐受的调节中具有重要作用，随着共刺激分子相关功能研究进展，已成为免疫学研究新的热点之一。近年来，研究发现B7-CD28家族成员包括B7-H1(PD-L1)、B7-H2(PD-L2)、B7-H3、B7-H4、B7H5(VISTA)及B7-H6等在肿瘤微环境中异常表达，并参与肿瘤免疫逃逸等，对肿瘤的发生发展以及肿瘤病人的预后都起着重要的作用。

B7-H5是B7家族负性调控分子之一，研究表明，B7-H5在包括结直肠癌、非小细胞肺癌、胃癌等多种恶性肿瘤组织中高水平表达，且与患者的临床分期、预后等密切相关。另外据文献报道B7-H5在关节炎、系统性红斑狼疮、牛皮癣等自身免疫性疾病的发病和进展中发挥关键作用。但目前对于B7-H5的检测还存在检测手段缺乏的问题。

发明内容

为了克服现有技术的上述缺陷，本发明提供一种对可溶性B7-H5蛋白含量进行定量分析的酶联免疫检测试剂盒及其用途，从而弥补现有技术的不足。

本发明首先提供一种可以结合B7-H5蛋白的单克隆抗体，所述的单克隆抗体，其中包含有B7-H5-2E5活B7-H5-7B10两种抗人B7-H5单克隆抗体；

其中所述抗人B7-H5单克隆抗体B7-H5-2E5抗体，包括重链和轻链，所述B7-H5-2E5的重链可变区(mVH)的氨基酸序列为SEQ ID NO.1：

DVKLQESGPGLVKPSQSLSLTCTVTGYSIASDYTWNWIRQFPGNKLEWMGYIDYSGATFYNPSLKSRISIIRDTSKNQFFLQLNSVTTGDTATYYCTRGFYYYGSDYWGQGTTLTVSS；

B7-H5-2E5的轻链可变区(mVL)的氨基酸序列为SEQ ID NO.2：

DVLMTQTPLSLPVSLGDQASISCRSSQSIVHNNGNTYLEWYLQKPGQSPKLLIYKVSNRFSGVPDRFSGSGSGTDFTLKINRVEAEDLGVYYCFQGSHVPSTFGGGTKLEIK；

所述的抗人B7-H5单克隆抗体为B7-H5-7B10抗体，包括重链和轻链，所述B7-H5-7B10的重链可变区(mVH)的氨基酸序列为SEQ ID NO.3：

EVQLKQSGPGLVAPSQSLSITCTVSGFSLTNHGVQWVRQSPGKGLEWLGVIWGDGNRNYHSALMSRLSINKDNSKSQVFLKLNRLQTDDTATYFCAKERRLGYYGEYDVMDYWGQGTSVTVSS；

B7-H5-7B10的轻链可变区(mVL)的氨基酸序列为SEQ ID NO.4：