[发明专利]两种表达水痘-带状疱疹病毒的gE蛋白的重组腺病毒及应用

说明书

本发明提供了两种表达水痘‑带状疱疹病毒的gE蛋白的重组腺病毒及应用，涉及生物医药技术领域。本发明提供了两种基于水痘‑带状疱疹病毒gE蛋白的核苷酸序列制备的重组腺病毒，以可表达水痘‑带状疱疹病毒gE蛋白的重组腺病毒同源或异源组合作为带状疱疹病毒疫苗，其在小鼠上能在短时间内诱导机体产生强烈的细胞及体液免疫反应。

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体涉及两种表达水痘-带状疱疹病毒的gE蛋白的重组腺病毒及应用。

背景技术

人是水痘-带状疱疹病毒(人疱疹病毒3型)(Varicella-Zoster Virus，VZV)的唯一自然宿主，其感染对象主要是儿童，几乎所有儿童在其成长过程中均感染过VZV，儿童感染后的临床表现为水痘，痊愈后少量病毒会长期潜伏在脊髓后根神经节或颅神经的感觉神经节内，当机体免疫力降低、免疫功能受损或年龄相关的免疫衰减时，残留在神经节内的病毒会大量复制并沿感觉神经传播至其所支配区域的皮肤组织复制，引发神经损伤和带状疱疹(Herpes zoster)。带状疱疹主要见于中老年人群，由于随着年龄增长，宿主体内针对VZV的细胞免疫相应降低，导致带状疱疹发病率随着年龄的增长而增加，60岁人群发病率为6～8/1000人/年，80岁人群发病率升至12/1000人/年。

目前，用于带状疱疹治疗的药物主要有口服药阿昔洛韦和泛昔洛韦，以及局部外用药喷昔洛韦，但这些药物并不能清除病毒，只能暂时抑制病毒复制，当宿主机体免疫力降低时，病毒会再次复制。因此，接种疫苗成为预防带状疱疹最有效的手段。迄今为止，美国食品药品监督管理局(FDA)先后批准了默沙东公司研发的减毒活疫苗-Zostavax和葛兰素史克公司(GSK)研制的亚单位疫苗-Shingrix用于预防50岁及以上人群带状疱疹。研究显示，这两种疫苗均能诱导机体产生细胞免疫和体液免疫，显着降低老年人带状疱疹和带状疱疹后神经痛的发生率。接种减毒活疫苗-Zostavax后，带状疱疹发生率可降低51.3％，带状疱疹后神经痛的发生率可降低66.5％，但其对带状疱疹的预防效果会随着年龄的增长而下降。由于减毒活疫苗存在病毒潜伏及诱发带状疱疹等风险，美国已于2020年7月1日停止销售减毒活疫苗-Zostavax。接种亚单位疫苗-Shingrix后，50岁以上人群总体保护效果高达97.2％，且不随年龄的增长而降低。2020年6月，该疫苗(欣安立适)在中国上市，尽管其在国内市场供不应求，但其高昂的费用提醒我们亟需开发拥有自主知识产权的带状疱疹疫苗。

发明内容

有鉴于此，本发明的目的在于提供两种表达水痘-带状疱疹病毒的gE蛋白的重组腺病毒及应用，以可表达带状疱疹病毒gE蛋白的重组腺病毒同源或异源组合作为状疱疹病毒疫苗，能在短时间内诱导机体产生强烈的细胞及体液免疫反应。

为了实现上述发明目的，本发明提供以下技术方案：

本发明提供了一种水痘-带状疱疹病毒gE蛋白，所述gE蛋白的核苷酸序列如SEQID NO.1所示。

本发明还提供了两种包含上述gE蛋白的核苷酸序列的重组腺病毒，所述两种重组腺病毒分别以人26型复制缺陷型重组腺病毒pAd26和猩猩63型复制缺陷型重组腺病毒pChAd63为骨架载体。

本发明还提供了上述重组腺病毒的构建方法，包括以下步骤：构建含有上述gE蛋白的核苷酸序列的穿梭质粒载体pShuttle26/gE和pShuttle63/gE；

将所述穿梭质粒载体pShuttle26/gE与pAd26进行DNA组装，得人26型复制缺陷型重组腺病毒质粒；

将所述穿梭质粒载体pShuttle63/gE与pChAd63进行DNA组装，得猩猩63型复制缺陷型重组腺病毒质粒；

分别将所述人26型复制缺陷型重组腺病毒质粒和猩猩63型复制缺陷型重组腺病毒质粒酶切后转染宿主细胞，拯救后分别得所述人26型重组腺病毒和猩猩63型重组腺病毒。