[发明专利]一种多重核酸检测系统及其制备方法与应用

权利要求书

1.一种多重核酸检测系统，其特征在于，包括针对目标核酸序列的扩增引物组和检测探针组，所述检测探针组包括Target探针和Beacon探针，

所述Target探针从5′端到3′端的组成依次为：5′端区、Target区、3′端区；

所述Beacon探针从5′端到3′端的组成依次为：5′端区、loop区、3′端区；

所述Target探针5′端区序列的5′端修饰LNA，所述3′端区序列的3′端修饰C3，所述Target区序列可与目标核酸序列反向互补；

所述Beacon探针5′端区序列的5′末端为n个连续的鸟嘌呤，n为1-8的整数，所述3′端区序列的3′末端修饰荧光报告基团，所述loop区序列与5′端区序列反向互补。

2.根据权利要求1所述多重核酸检测系统，其特征在于，所述Target探针的3′端区序列的3′端为CGCG。

3.根据权利要求1所述多重核酸检测系统，其特征在于，所述Beacon探针的5′端区序列长度为5～8bp，所述3′端区序列长度为5～8bp，和/或所述loop区序列长度为30～50bp。

4.根据权利要求1-3任一项所述多重核酸检测系统，其特征在于，所述Beacon探针的5″端区序列的5′末端连续的鸟嘌呤个数n为3～5的整数。

5.根据权利要求1-4任一项所述多重核酸检测系统，其特征在于，所述扩增引物组包括CLO引物对，

所述CLO引物对中的每一条CLO引物从5′端到3′端的组成依次为：5′端区、loop区、3′端区；

所述5′端区序列长度为18～25bp，所述3′端区序列长度为10～15bp，和/或所述loop区序列长度为15～25bp。

6.根据权利要求5所述多重核酸检测系统，其特征在于，所述扩增引物组还包括通用引物对，所述通用引物对中的上游通用引物与CLO引物对中上游CLO引物的loop区一致；所述通用引物对中的下游通用引物与CLO引物对中下游CLO引物的loop区一致。

7.根据权利要求1-6任一项所述多重核酸检测系统，其特征在于，所述Beacon探针的3′端区序列的3′末端修饰荧光报告基团选自FAM、TET、JOE、HEX、Cy3、TAMRA、ROX、Texas、Red、LC RED640、Cy5、LC RED705、Alexa Fluor 488和Alexa Fluor 750。

8.一种多重核酸检测方法，其特征在于，包括如下步骤：

获取待测生物样本核酸；

将上述生物样本核酸、DNA聚合酶与权利要求1-7任一项所述多重核酸检测系统混合配制成PCR反应体系，进行PCR反应和熔解曲线分析。

9.根据权利要求8所述多重核酸检测方法，其特征在于，所述PCR反应的反应程序为降落PCR。

10.根据权利要求8-9任一项所述多重核酸检测方法，其特征在于，所述PCR反应体系中，针对不同目标核酸序列的各条CLO引物浓度相同，每条通用引物的浓度也相同，且每条通用引物终浓度为CLO单条引物终浓度的5～15倍，进一步优选为10倍。

11.根据权利要求8-9任一项所述多重核酸检测方法，其特征在于，所述PCR反应体系中，针对不同目标核酸序列的各条Target探针的浓度相同，各条Beacon探针浓度相同，每条Target探针终浓度为Beacon探针终浓度的1～5倍，进一步优选为2倍。

12.根据权利要求8-11任一项所述多重核酸检测方法，其特征在于，所述方法可检测目标核酸序列的种类为1～20种。