[发明专利]富勒烯及其衍生物在细胞重编中的应用

权利要求书

1.富勒烯及其衍生物在细胞重编程中的应用。

2.如权利要求1所述的富勒烯及其衍生物在细胞重编程中的应用，其特征在于：所述的富勒烯及其衍生物用于提高细胞重编程效率和/或增强干细胞的自我更新能力。

3.如权利要求1所述的富勒烯及其衍生物在细胞重编程中的应用，其特征在于：所述的细胞重编程为转录因子诱导性多能干细胞。

4.如权利要求3所述的富勒烯及其衍生物在细胞重编程中的应用，其特征在于：所述的诱导性多能干细胞为利用重编程因子Oct4、Klf4、Sox2和c-Myc诱导而成的诱导性多能干细胞。

5.如权利要求1所述的富勒烯及其衍生物在细胞重编程中的应用，其特征在于：所述富勒烯及其衍生物由如下方法制备而成：将富勒烯粉末溶于THF溶液中，在搅拌过程加入等体积的水；利用旋转蒸发仪蒸发去除THF及其部分水，至富勒烯及其衍生物浓度40μg/mL。

6.如权利要求1所述的富勒烯及其衍生物在细胞重编程中的应用，其特征在于：所述的富勒烯及其衍生物为C60富勒烯、C70富勒烯、C84富勒烯、C78富勒烯、C76富勒烯中的一种或多种。

7.如权利要求1所述的富勒烯及其衍生物在细胞重编程中的应用，其特征在于：所述的富勒烯及其衍生物为单金属富勒烯、双金属富勒烯、氮化物富勒烯、碳化物富勒烯中的一种或多种。

8.如权利要求1所述的富勒烯及其衍生物在细胞重编程中的应用，其特征在于：所述的富勒烯及其衍生物为羟基化富勒烯、羧基化富勒烯、氨基富勒烯、PEG-富勒烯中的一种或者多种。

9.一种制备诱导性多能干细胞的方法，其特征在于包括如下步骤：

(1)制备水相悬浮的富勒烯纳米材料溶液；

(2)制备诱导性多能干细胞：将步骤(1)所获得的富勒烯纳米材料溶液加入到诱导性多能干细胞培养体系的培养基中。

10.如权利要求9所述的制备诱导性多能干细胞的方法，其特征在于：

(1)制备水相悬浮的富勒烯纳米材料溶液：

取富勒烯C60粉末置入未开封过的500mL四氢呋喃有机溶液中，在室温下密封避光搅拌24h后，用0.45μm的膜过滤掉未溶解的富勒烯C60颗粒,将过滤后的溶液放置在搅拌器上搅拌，同时以1L/min的速度加入同体积的超纯水，混合后的溶液为黄色富勒烯纳米晶体，获得富勒烯C60纳米晶体水相悬浮液，搅拌进行5min，充分混合后，用旋转蒸发仪在55℃将溶液中的THF蒸发掉，再将温度调至80℃蒸发除去多余的水分，至浓度为40μg/mL,获得富勒烯C60纳米材料溶液；或者，将水溶性的富勒烯C60衍生物，将其直接溶于超纯水中，获得富勒烯C60纳米材料溶液；

(2)制备诱导性多能干细胞：

将原代GFP-OCT4的MEF细胞接种于细胞培养皿中，通过Yamanaka诱导法将Oct4、Klf4、Sox2和c-Myc(OSKM)四种因子通过病毒转染法将其转入细胞中获得iPSCs；转染当天为iPSCs诱导实验第0天；培养条件为37摄氏度，5％CO₂；在iPSCs诱导第3天开始，加入由步骤(1)所获得的富勒烯C60纳米材料溶液至浓度为1-5μg/mL；每天更换含1-5μg/mL富勒烯C60纳米材料溶液的培养基，处理原代MEF细胞3天；第6天将处理的细胞转移至滋养层细胞上，每天更换不含富勒烯的培养基，第8到14天即可获得类似ESCs形态的iPSCs克隆。