[发明专利]一种提高重组毕赤酵母产豆血红蛋白的方法

权利要求书

1.一种提高重组毕赤酵母产豆血红蛋白的方法，其特征在于，该方法包括以下步骤：

1）毕赤酵母重组菌种子液的制备；

2）将步骤1）得到的毕赤酵母重组菌种子液接种到生长培养基中进行菌体发酵培养；

3）待培养至对数生长中期后，将发酵液静置或离心，使菌液分离，倾倒出上清液，得到对数生长期的毕赤酵母菌体，向毕赤酵母菌体中补入与倾倒出的上清液等体积新鲜的发酵培养基，重新进行发酵，发酵过程中，每隔24h，向发酵培养基中补入适量的甲醇，使发酵培养基中甲醇终浓度维持在0.8-1.2%之间；4）发酵结束后，将发酵液静置，小心倾倒进行菌液分离，得到含有豆血红蛋白的发酵液清液，进行豆血红蛋白的含量测定。

2.如权利要求1所述的一种提高重组毕赤酵母产豆血红蛋白的方法，其特征在于步骤1）中，毕赤酵母重组菌种子液制备用的培养基体系中含有1%的葡萄糖，1%的甘油，2%的普通蛋白胨，1%的酵母提取物。

3.如权利要求1所述的一种提高重组毕赤酵母产豆血红蛋白的方法，其特征在于步骤1）中，毕赤酵母重组菌种子液培养条件为：培养时间为24h，培养温度30℃，摇床转速250r/min，毕赤酵母重组菌种子液的接种量为2%。

4.如权利要求1所述的一种提高重组毕赤酵母产豆血红蛋白的方法，其特征在于步骤2）中生长培养基的体系中含有1%的酵母粉，2%的蛋白胨，0.34%的无氨基酵母氮源，1%的硫酸铵，4×10^-5%的生物素，1%的甘油，100mM pH为6.0的磷酸钾缓冲液。

5.如权利要求1所述的一种提高重组毕赤酵母产豆血红蛋白的方法，其特征在于步骤2）菌体发酵培养的条件为：培养温度30℃，摇床转速250r/min。

6.如权利要求1所述的一种提高重组毕赤酵母产豆血红蛋白的方法，其特征在于步骤3）中发酵培养基的体系中含有1%的酵母粉，2%的蛋白胨，0.34%的YNB，1%的硫酸铵，4×10^-5 %的生物素，1%的甲醇，100mM pH为6.0的磷酸钾缓冲液，10μM/L的铁盐。

7.如权利要求1所述的一种提高重组毕赤酵母产豆血红蛋白的方法，其特征在于步骤3）中，发酵培养基的培养条件为：培养温度28℃，摇床转速250r/min。

8.如权利要求1所述的一种提高重组毕赤酵母产豆血红蛋白的方法，其特征在于步骤3）中，发酵培养基中甲醇终浓度维持为0.8-1.2%，发酵时间为96h。

9.如权利要求4或6所述的一种提高重组毕赤酵母产豆血红蛋白的方法，其特征在于所述蛋白胨为酵母蛋白胨、大豆蛋白胨、酪蛋白胨、牛肉蛋白胨及鱼蛋白胨中的任一种。

10.如权利要求6所述的一种提高重组毕赤酵母产豆血红蛋白的方法，其特征在于所述铁盐为血红素、高铁血红素、氯化血红素、柠檬酸铁、硫酸亚铁及氯化亚铁中的任一种。