[发明专利]同步检测SGLV与YEZV双重荧光定量RT-PCR核酸组、试剂盒及方法

权利要求书

1.一组用于同步检测SGLV与YEZV的双重荧光定量RT-PCR核酸，其特征是，所述核酸包括SGLV引物对、YEZV引物对、SGLV荧光探针和YEZV荧光探针；

所述SGLV引物对包括SGLV上游引物和SGLV下游引物，SGLV上游引物的核苷酸序列如序列表中序列1所示，SGLV下游引物的核苷酸序列如序列表中序列2所示；

所述YEZV引物对中包括YEZV上游引物和YEZV下游引物，YEZV上游引物的核苷酸序列如序列表中序列3所示，YEZV下游引物的核苷酸序列如序列表中序列4所示；

所述SGLV荧光探针的核苷酸序列如序列表中序列5所示，SGLV荧光探针的5’端链接HEX荧光基团，3’端链接BQ1荧光猝灭基团；

所述YEZV荧光探针的核苷酸序列如序列表中序列6所示，YEZV荧光探针的5’端链接CY5荧光基团，3’端链接BQ2荧光猝灭基团。

2.一种包括如权利要求1所述核酸组的同步检测SGLV与YEZV的双重荧光定量RT-PCR试剂盒。

3. 根据权利要求2所述的一种同步检测SGLV与YEZV的双重荧光定量RT-PCR试剂盒，其特征是，所述试剂盒还包括2X RT-PCR试剂、Taq酶、引物逆转录酶、阴性对照、阳性对照和RNase-free水。

4.根据权利要求2或3所述的一种同步检测SGLV与YEZV的双重荧光定量RT-PCR试剂盒，其特征是，所述SGLV上游引物为20μM，所述SGLV下游引物的浓度为20μM，所述YEZV上游引物的浓度为10μM，所述YEZV下游引物的浓度为10μM。

5.根据权利要求2或3所述的一种同步检测SGLV与YEZV的双重荧光定量RT-PCR试剂盒，其特征是，所述SGLV荧光探针浓度为10μM，所述YEZV荧光探针浓度为5μM。

6.根据权利要求3所述的一种同步检测SGLV与YEZV的双重荧光定量RT-PCR试剂盒，其特征是，所述阳性对照为包含有如序列表中序列7和序列8所示的核苷酸序列的质粒，所述阴性对照为正常人群血清提取的RNA液。

7.一种使用如权利要求2所述试剂盒的同步检测SGLV与YEZV双重荧光定量RT-PCR方法，其特征是，包括以下步骤：

A、提取待检样品的RNA；

B、使用试剂盒中试剂将待检样品的RNA进行荧光PCR扩增反应；

C、设立阳性对照和阴性对照，将阳性对照和阴性对照分别进行荧光PCR扩增反应；

D、根据信噪情况设定和调整基线和阈值，通过收集待检样品RNA的荧光曲线形态和Ct值判定结果。

8. 根据权利要求7所述的一种同步检测SGLV与YEZV双重荧光定量RT-PCR方法，其特征是，所述步骤B中，荧光PCR的反应参数为42℃ 5min，95℃ 15s，1个循环；95℃ 5s，55℃30s，45个循环。

9.根据权利要求7所述的一种同步检测SGLV与YEZV双重荧光定量RT-PCR方法，其特征是，所述步骤D中判定结果的方法为Ct值＞38的样品为阴性，Ct值＜32的样品为阳性，Ct值在32-38之间的样品需重新做3次检测，重做得到的测定结果有2次及以上Ct值＜38的为阳性，有2次及以上Ct值均＞38的为阴性，Ct值为其它情况需重新采样检测。